牛胰島素(Ins)Elisa試劑盒說明書
 

　　本試劑盒僅供研究使用。

　　檢測范圍： 96T

　　2 mIU/L -50 mIU/L

　　
      牛胰島素(Ins)Elisa試劑盒說明書使用目的：

　　本試劑盒用于測定牛血清、血漿及相關(guān)液體樣本中胰島素(Ins)含量。

　　實驗原理

　　牛胰島素(Ins)Elisa試劑盒說明書本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定 標(biāo)本 中牛胰島素(Ins)水平。用純化的牛胰島素(Ins)抗體

　　包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入胰島素(Ins)，再與HRP 標(biāo)記的

　　胰島素(Ins)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB 顯色。

　　TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣

　　品中的胰島素(Ins)呈正相關(guān)。用 酶標(biāo)儀 在450nm 波長下測定吸光度(OD 值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲

　　線計算樣品中牛胰島素(Ins)濃度。

　　
    牛胰島素(Ins)Elisa試劑盒說明書試劑盒組成

　　1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶

　　2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品(96 mIU/L) 0.5ml×1 瓶

　　3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶

　　4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份

　　5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張

　　6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個

　　
      標(biāo)本要求

　　1.標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能

　　馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

　　2.不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

　　操作步驟

　　1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小 試管 中進行稀

　　釋。

　　48 mIU/L 5 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　24 mIU/L 4 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　12 mIU/L 3 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　6mIU/L 2 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　3 mIU/L 1 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　2. 加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、

　　待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，

　　然后再加待測樣品10μl(樣品*終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡

　　量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

　　3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

　　4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

　　5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此

　　重復(fù)5 次，拍干。

　　6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

　　7. 溫育：操作同3。

　　8. 洗滌：操作同5。

　　9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

　　10 分鐘.

　　10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

　　11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止

　　液后15 分鐘以內(nèi)進行。

　
操作程序總結(jié)：

　　計算

　　以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的

　　OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計算出標(biāo)

　　準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，

　　即為樣品的實際濃度。

　　注意事項

　　1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未

　　用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

　　2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

　　3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間*好

　　控制在5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

　　4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，*好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD 值

　　大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD 值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定，計

　　算時請*后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

　　5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6.底物請避光保存。

　　7.嚴(yán)格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

　　8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

　　9.本試劑不同批號組分不得混用。

　　保存條件及有效期

　　1.試劑盒保存：;2-8℃。

　　2.有效期：6 個月

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