消化道病毒多重熒光PCR檢測試劑盒

產(chǎn)品名稱：消化道病毒多重熒光PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號:FS-01P99993
操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

產(chǎn)品特點：

1、公司產(chǎn)品僅用于科研不需要單獨純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產(chǎn)品只適合于動物材料，不適合于植物材料，因為植物線粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

產(chǎn)品組成:

使用方法:

一:培養(yǎng)細胞預處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養(yǎng)細胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細胞兩次,離心得到的細胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細胞預處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動物組織,因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細胞兩次,得到的白細胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取

5.在細胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產(chǎn)生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,有時候出現(xiàn)沉淀漂浮是正?，F(xiàn)象,取上清時避開漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發(fā)。

13. 重復上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產(chǎn)量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結合DNA能力較強,如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機械斷裂,電泳時DNA可能不呈現(xiàn)專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正熱銷的產(chǎn)品：
Ai-Phospho-p63 (Ser395) /FITC 熒光su標記磷suan化P63抑制基因抗體IgGMulti-class aibodies： 0.2ml

Rabbit Ai-horse IgG/Biotin 生物su化兔抗馬IgGMulti-class aibodies： 0.1ml

心肌肌鈣蛋白抗體 ai-CTn1 0.1ml

Goat Ai-Mouse IgM/PE-Cy3 PE-Cy3標記的羊抗小鼠IgM 0.1ml

FLT3L 英文名稱： FMS樣酪suan激mei3配體抗體 0.2ml

Rhesus aibody Rh Phospho-YAP1(Ser127) 磷suan化原癌基因Yes相關蛋白1抗體  0.1ml

Rabbit Ai-horse IgG/Biotin 生物su化兔抗馬IgGMulti-class aibodies： 0.1ml

Nm23(NDP Kinase A,NDPKA) 轉移抑制基因抗原Multi-class aibodies： 0.5mg

Ai-phospho-APP/ABPP(Thr668) 磷suan化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體Multi-class aibodies： 0.1ml

Rhesus aibody Rh phospho-ATP citrate lyase(Ser455) 磷suan化三磷suan腺檸檬suan裂解mei抗體  0.1ml

山羊抗豬 IgG(H+L)/HRP 0.1ml 美國公司分裝

VEGFB 英文名稱： 血管內(nèi)皮生長因子B 0.1ml

DBX2 英文名稱： 腦發(fā)育同源蛋白2抗體 0.2ml

Ai-phospho-APP/ABPP(Thr668) 磷suan化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體Multi-class aibodies： 0.1ml

SSTR3 英文名稱： 生長抑su受體3抗體 0.1ml

EPO 英文名稱： 紅細胞**su抗體 0.1ml

血管粘附蛋白1抗體 Ai-VAP1 0.1ml

Ai-TRP1/gp75 /FITC 熒光su標記酪氨suanmei相關蛋白1抗體IgGMulti-class aibodies： 0.2ml

Rhesus aibody Rh phospho-ILK-1(Ser259) 磷suan化整合su連接激mei1抗體  0.1ml

Camk1g(Calcium/calmodulin depende protein kinase IG) 鈣/鈣調(diào)蛋白依賴蛋白激meiIG抗原Multi-class aibodies： 0.5mg
消化道病毒多重熒光PCR檢測試劑盒甲suan乙酯(standard for GC,≥99.5%(GC)) 除蟲菊酯 標準品  CAS號：8003-34-7 250mg石蠟切片總膽固舒爾茨直接染色試劑盒

乙二乙(標準品)噠螨靈 標準品  CAS號：96489-71-3 250mg凍切片總膽固舒爾茨染色試劑盒

芥suan(標準品)PYRIDAFEHION 標準品  CAS號：100mg游離膽固毛地黃皂法（DIGITONIN）舒爾茨染色試劑盒

標準溶液(1mg/ml,溶劑：甲) 噠草特 標準品  CAS號：55512-33-9 250mg石蠟切片游離膽固毛地黃皂法（DIGITONIN）舒爾茨間接染色試劑盒

標準溶液(100μg/ml,u=5%)百快隆 標準品  CAS號：57369-32-1 250mg石蠟切片游離膽固毛地黃皂法（DIGITONIN）舒爾茨直接染色試劑盒

乙二(標準品)喹 標準品  CAS號：13593-03-8 250mg凍切片游離膽固毛地黃皂法（DIGITONIN）舒爾茨染色試劑盒

烯suan乙酯(標準品) 二啉suan 標準品  CAS號：84087-01-4 250mg總游離膽固菲律賓（FILIPIN）熒光染色試劑盒

a-硫丹(標準品)滅藻醌 標準品  CAS號：2797-51-5 50mg石蠟切片總游離膽固菲律賓（FILIPIN）熒光間接染色試劑盒