您需要準備好細胞所要用到的培養(yǎng)基和相關試劑,雖然所有的貼壁,半貼壁或者懸浮細胞處理方式差不多,但是不同的實驗室培養(yǎng)條件和處理力度還有試劑的批間差這些問題存在,也會導致對細胞處理不當,或者環(huán)境的不適應而造成細胞的死亡。
1、收到細胞,第1時間要觀察細胞形態(tài)是否正常,對于貼壁細胞則要注意看貼壁情況是否很好,觀察細胞密度有疑議及時咨提供細胞的技術人員。由于運輸?shù)臅r間或者溫度的變化,很多貼壁細胞在盛滿培養(yǎng)基的瓶子里生長的狀態(tài)和平時有點不一樣,主要是貼壁牢固問冋題。比如29紅,平時貼壁就不是很牢,在裝滿的培養(yǎng)基瓶子里面,會發(fā)生大片的脫落,細胞聚集在一起,但是細胞生長還是正常的,通過離心收集,加以胰酶的消化,重新打散,又可以正常的貼壁生長當通過上一步的觀察,細胞初步沒有任何問題時,進行下一步操作。
2、當收到的細胞密達到8%左右時,則處理如下：
棄除瓶中大部分培養(yǎng)基,僅保皕5到1∽L培養(yǎng)所需的常規(guī)培養(yǎng)基;或更換新鮮的培養(yǎng)基,置于培養(yǎng)箱中,隨后毎夭觀察。細胞在低于正常生長溫度情況下,會調整為靜止期,或者慢速生長期,必須恢復37度的環(huán)境至少3個小時左右,才能重新調整到接近對數(shù)生長期的狀態(tài),在對數(shù)生長期進行細胞的傳代會大大增加傳代的成功率,和細胞的存活率。
3、如果經第1步觀察發(fā)現(xiàn)細胞密度超過90%,并且細胞狀態(tài)很好時,則復溫后2個小時需要立即傳代。傳代的比例應依據(jù)不同的細胞而定。對于生長比較快,狀態(tài)穩(wěn)定,不易受外界景響的細胞可以一次多傳幾瓶;對于生長較慢,細胞比較薄,狀態(tài)容易波動的細胞類型,一些,保證每瓶細胞密度大些,便于穩(wěn)定生長。至于一些比較陌生的細胞,第1次處理也可以照第2種情況