細胞凍存操作步驟:
1、消化細胞,將細胞懸液收集至離心管中。
2、1000rpm離心10分鐘,棄上清液。
3、沉淀加含保護液的培養(yǎng),計數(shù),調(diào)整至5×106/ml左右。
4、將懸液分至凍存管中,每管1 ml。
5、將凍存管口封嚴。如用安瓿瓶則火焰封口,封口要嚴,否則復(fù)蘇時易出現(xiàn)爆裂。
6、貼上標簽,寫明細胞種類,凍存日期。凍存管外拴一金屬重物和一細繩。
7、按下列順序降溫:室溫→4℃(20分鐘)→冰箱冷凍室(30分鐘)→低溫冰箱(-30℃ 1小時)→氣態(tài)氮(30分鐘)→液氮。
注意:操作時應(yīng)小心,以免液氮**。液氮定期檢查,隨時補充,不能揮發(fā)干凈,一般30立升的液氮能用1~1.5月。