ELISA方法的基本原理是酶分子與抗體或抗抗體分子共價結(jié)合，此種結(jié)合不會改變抗體的免 疫學特性，也不影響酶的生物學活性。此種酶標記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無色的還原型變成有色的氧化型，出現(xiàn)顏色反應。因此，可通過底物的顏色反應來判定有無相應的免 疫反應，顏色反應的深淺與標本中相應抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應可通過ELISA檢測儀進行定量測定，這樣就將酶化學反應的敏感性和抗原抗體反應的特異性結(jié)合起來，使ELISA方法成為一種既特異又敏感的檢測方法。
注意事項：
1、操作前應對實驗的物理參數(shù)有充分的了解，如環(huán)境溫度(保持在18 C~25℃)、反應孵育溫度和孵育時間、洗滌的次數(shù)等，要先查看水育箱溫度，是否符合要求。
2、正確使用加樣器加樣器應垂直加入標本或試劑，避免刮擦包被板底部。加樣過程中避免液體外濺，血清殘留在反應孔壁上，加樣器吸頭要清洗干凈，避免污染，加樣次序要與說明書一致，否則可導致結(jié)果錯誤，實驗重復性差。
3、手工洗板加洗液時沖擊力不要太大，洗滌次數(shù)不要超過說明書推薦的洗滌次數(shù)，洗液在反應孔內(nèi)滯留的時間不宜太長。不要使洗液在孔間竄流，造成孔問污染，導致假陰性或假陽性。
4、要保證加液量一致 我們在使用時感覺滴瓶加液不如加樣器好，滴瓶不易控制加液量不準，造成顯色不統(tǒng)一，判斷錯誤。
5、顯色液量不可過多 加樣的工作環(huán)境不能處于陽光直射的環(huán)境下，加顯色系統(tǒng)后要避光反應，顯色液量不能過多，以免顯色過強。
6、試劑的影響因數(shù):應選用有*批準文號，質(zhì)量靠得住的產(chǎn)品，不能圖便宜，忽視質(zhì)量保證。試劑應妥善保存于4℃冰箱內(nèi)，在使用時先平衡至室溫，不同批號的試劑組分不宜交叉使用。試劑開啟后要在一周內(nèi)用完，剩余的試劑下次用時應先檢查是否變質(zhì)，，顯色劑如被污染變色將造成全部顯色，導致錯誤結(jié)果。過期的試劑不宜再用，若別無選擇，應做好雙份質(zhì)控品的監(jiān)測，確保結(jié)果的可靠性。