細(xì)胞傳代步驟:
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
我司全程提供細(xì)胞生物體、生長特性、來源、器官、類型、形態(tài)、培養(yǎng)條件、應(yīng)用、組織、凍存條件等復(fù)蘇及凍存細(xì)胞株說明書信息,我們專業(yè)您的細(xì)胞系實驗,讓您實驗再無煩擾!
產(chǎn)品名稱:細(xì)胞培養(yǎng)
貨號:BJ-205561
實驗要點及說明 :
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃**,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
使用方法:
收到細(xì)胞后,請按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯??鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入完全培養(yǎng)液終止消化;
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代,然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4) 待細(xì)胞完全貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,后將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織完全被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
動物 /組織 色素C釋放凋亡檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10次
植物 色素C釋放凋亡檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10次
石蠟切片組織 色素C**組織化學(xué)檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10/20次
調(diào)亡DNA條帶檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10次
G-B 活力和凋亡檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:50次
ATP生物發(fā)光法 繁殖與毒性定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:50次
R-G 活力和凋亡檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:50次
ANNEXIN V-FITC標(biāo)記法 凋亡檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10/20次
Phalloidin-FITC標(biāo)記法 凋亡檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10次
核抗原-FITC標(biāo)記法 凋亡檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10次
凋亡誘導(dǎo)(DNA合成抑制)試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
凋亡誘導(dǎo)(DNA損傷)試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
凋亡誘導(dǎo)(DNA酶抑制)試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
BrdU標(biāo)記法 繁殖流式 儀檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10/20次
BrdU標(biāo)記法 繁殖比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10/50 次
BrdU標(biāo)記法 繁殖熒光定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10/50 次
BrdU標(biāo)記法載玻片 繁殖熒光顯微鏡檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10/20次
BrdU標(biāo)記法組織冰凍切片 繁殖熒光顯微鏡檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10/20次酒石酸長春瑞賓/重酒石酸長春瑞賓 Vinorelbine Tartrate 125317-39-7 質(zhì)量規(guī)格:>98%,USP,BR
重酒石酸長春瑞賓(標(biāo)準(zhǔn)品) Vinorelbine Tartrate 125317-39-7 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
伏立康唑 Voriconazole 137234-62-9 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
伏立康唑(標(biāo)準(zhǔn)品) Voriconazole 137234-62-9 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品
伏立諾他 Vorinostat/SAHA 149647-78-9 質(zhì)量規(guī)格:>99%,可用于 培養(yǎng)
伏立諾他(標(biāo)準(zhǔn)品) Vorinostat/SAHA 149647-78-9 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
醋酸阿基瑞林 Argireline Acetate 616204-22-9 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
L-甲狀腺素甲狀腺素 Levothyroxine 51-48-9 質(zhì)量規(guī)格:>98,BR
腺嘌呤 Adenine 73-24-5 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
腺嘌呤(標(biāo)準(zhǔn)品) Adenine 73-24-5 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
琥乙紅霉素 Erythromycin ethylsuccinate 1264-62-6 質(zhì)量規(guī)格:potency>765 μg of erythromycin (C37H67NO13) per mg,USP35
細(xì)胞培養(yǎng)布洛芬 Ibuprofen 15687-27-1 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BP/USP
布洛芬(標(biāo)準(zhǔn)品) Ibuprofen 15687-27-1 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
馬來酸依那普利 Enalapril Maleate 76095-16-4 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,USP
馬來酸依那普利(標(biāo)準(zhǔn)品) Enalapril Maleate 76095-16-4 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品
氟尿嘧啶,5-氟脲嘧啶,5-氟尿嘧啶 5-Fluorouracil 51-21-8 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR,可用于 培養(yǎng)
氟尿嘧啶,5-氟脲嘧啶,5-氟尿嘧啶(標(biāo)準(zhǔn)品) 5-Fluorouracil 51-21-8 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
琥珀酸舒馬曲普坦 Sumatriptan succinate 103628-48-4 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
琥珀酸舒馬曲普坦(標(biāo)準(zhǔn)品) Sumatriptan succinate 103628-48-4 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
硫酸鏈霉素 Streptomycin Sulphate 3810-74-0 質(zhì)量規(guī)格:>720IU/MG,BR
硫酸鏈霉素(標(biāo)準(zhǔn)品) Streptomycin Sulphate 3810-74-0 質(zhì)量規(guī)格:效價測定
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