ELISA實(shí)驗(yàn)間接法注意事項(xiàng)如下：
1.應(yīng)注意分離血清時(shí)，血液要求放置室溫中凝固收縮，不宜置冰箱（4℃）中凝固，否則會(huì)使大部分IgM和少量IgG喪失活性。
2.為了使特異性結(jié)合的抗體量盡可能多，包被微量反應(yīng)板凹孔的抗原應(yīng)該稍微過(guò)量。
3.在孵育或洗滌過(guò)程中，已吸附的抗原可能有部份會(huì)從固相載體上被洗滌下來(lái)。從而使加入被檢血清中的特異性抗體以外的蛋白質(zhì)很可能會(huì)吸附到原來(lái)包被抗原凹孔的空白處，增加本底顏色，產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)。
4.在稀釋劑及洗滌劑中加入各種保護(hù)性阻劑可用來(lái)抑制非特異性蛋白的競(jìng)爭(zhēng)性吸附作用。
5.在稀釋劑和洗滌劑中所加的吐溫-20很重要。它不僅能消除非特異性的本底反應(yīng)，而且還可增加陽(yáng)性標(biāo)本的敏感度，這可能與吐溫-20能分離所吸附的非特異性物質(zhì)有關(guān)。目前采用的洗滌劑為PH7.4 PBS（含0.2‰KCL）加0.05%吐溫-20，如無(wú)吐溫-20，也可用吐溫故-40或吐溫-60代替。但吐溫-80本底較高，不宜應(yīng)用。