ELISA 實(shí)驗(yàn)各類組織勻漿處理

ELISA 實(shí)驗(yàn)中各類組織勻漿（不易勻漿的組織）的采集、處理和保存；（需要測(cè)蛋白濃度）

1、采集組織，在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，稱重，剔除附屬的結(jié)締組織，稱取組織塊。

2、用移液管量取 0.1M PBS 或者用 0.86％冷生理鹽水，勻漿介質(zhì)或生理鹽水的體積總量應(yīng)該是組織塊重量的 9 倍，用眼科小剪盡快剪碎組織塊（天然時(shí)操作要在冰水浴中進(jìn)行，將盛有組織 的小燒杯放入冰水中）。

3、勻漿的方式有多種：

a)手工勻漿：將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中，再將剩余的 1/3 勻漿介質(zhì)或生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊，一起倒入勻漿管中進(jìn)行勻漿，左手持勻漿管將下 端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手將搗桿垂直插入套管中，上下轉(zhuǎn)動(dòng)研磨數(shù)十次（6～8 分鐘），充分研碎，使組織勻漿化。

b)機(jī)器勻漿：用組織搗碎機(jī) 10000～15000r/min 上下研磨制成 10％組織勻漿，也可用內(nèi)切式組織勻漿機(jī)制備（勻漿時(shí)間 10 秒/次，間隙 30 秒，連續(xù) 3～5 次，在冰水中進(jìn)行），皮膚、肌肉組織等可延長(zhǎng)勻漿時(shí)間。

c) 超聲粉碎：用超聲粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，可用 Soniprep150 型超聲波發(fā)生器以振幅 14 微米超聲處理 30 秒使細(xì)胞破碎，也可用國(guó)產(chǎn)超聲波發(fā)生儀，用 40 安培，5 秒/次，間隙 10 秒反復(fù) 3～5 次。

4、將制備好的 10％勻漿用離心機(jī) 4℃，3000rpm 離心 15min，將離心好的勻漿留上清，棄下面沉淀。

5、取上清。 分裝凍存?zhèn)溆茫?

2-8℃下，可放置保存 24-48 小時(shí)；

-20℃下，可放置保存 1 個(gè)月；

-70℃下，可放置保存 6 個(gè)月；

6、根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要，取適量上清夜進(jìn)行各種 ELISA 測(cè)定。