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其他生化試劑試驗(yàn)步驟

其他生化試劑試驗(yàn)步驟:

1、貼壁細(xì)胞用胰酶消化,離心收集。

2、細(xì)胞重懸于冰冷的PBS漂洗一次,離心收集。試驗(yàn)步驟2再重新作一邊。

3、加入5mlDNA提取緩沖液,(10mmol/LTris-cl,0.1mol/LEDTA,o.5%SDS,混勻。

4、加入25ul蛋白酶K,使終濃度達(dá)到100ug/ml,混勻,50℃水浴3h,

5、用等體積的酚抽提一次,2500rpm離心收集水相,用等體積的(酚,異戊醇)混合物抽提一次,2500r/min離心收集水相

6、用等體積的,異戊醇抽提一次。加入等體積的5mol/LLiCL,混勻,冰浴,10min.

7、2500rpm離心10min.轉(zhuǎn)上清于一離心管中。加入等體積的異丙醇。室溫10min2500rpm,離心10min。棄上清。

8、加入0.1倍體積3mol/L乙酸鈉(PH5.2)與2倍體積-20℃預(yù)冷無(wú)水乙醇。-2020min。

9、12000r/min,室溫離心5min。棄上清。將DNA溶于適量TE中。