使用及效果:
標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)體系:
10×擴(kuò)增緩沖液 10ul
4種dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加雙或三蒸水至 100ul
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱: 轉(zhuǎn)基因大豆MON87708品系檢測試劑盒(熒光-PCR法)
規(guī)格: 50T
貨號:BH-P64500
公司產(chǎn)品僅用于科研分類:熒光定量PCR試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。
PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在學(xué)中zui小檢出率為3個。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
PCR反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。
瓜亡革菌泛酸激酶1抗體Anti-CCNT1 AntibodyCD68分子(CD68)ELISA試劑盒
枯草芽孢桿菌泛酸激酶2抗體Anti-CCNE1 AntibodyCD63分子(CD63)ELISA試劑盒
韓國海桿狀菌泛酸激酶3抗體Anti-CCR1 AntibodyCD5分子樣蛋白(CD5L)ELISA試劑盒
微紫青霉p53調(diào)控PA26核蛋白抗體Anti-CCR1 AntibodyCD5分子(CD5)ELISA試劑盒
香栓孔菌26S蛋白酶調(diào)節(jié)亞型S5a抗體Anti-CCR10 AntibodyCD4分子(CD4)ELISA試劑盒
枯草芽胞桿菌枯草亞種絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酶3B抗體Anti-CCR2 AntibodyCD45分子(CD45)ELISA試劑盒
靈芝蛋白香葉烯基轉(zhuǎn)移酶1α抗體Anti-CCR10 AntibodyCD44分子(CD44)ELISA試劑盒
牛肝菌(可訂購)泛素連接酶抗體Anti-CCR2 AntibodyCD44變體6(CD44-v6)ELISA試劑盒
銹色房屋芽胞桿菌PGBD3蛋白抗體Anti-CCR1 AntibodyCD40配體(CD40L)ELISA試劑盒
赭曲霉泛酸激酶4抗體Anti-CCR3 AntibodyCD3分子(CD3)ELISA試劑盒
壞死梭桿菌壞死亞種膜鈣ATP酶1抗體Anti-CCR2 AntibodyCD34分子(CD34)ELISA試劑盒
Taonella膜鈣ATP酶4抗體Anti-CCR3 AntibodyCD30分子(CD30)ELISA試劑盒
嗜酸放線線束菌*膜鈣ATP酶4B抗體Anti-CCR3 AntibodyCD22分子(CD22)ELISA試劑盒
大腸埃希氏桿菌膜鈣轉(zhuǎn)運(yùn)ATP酶抗體Anti-CCR3 AntibodyCD209分子(CD209)ELISA試劑盒
Paenibacillus溶質(zhì)載體蛋白家族21成員2抗體Anti-CCR4 AntibodyCD19分子(CD19)ELISA試劑盒
白色念珠脈周蛋白1抗體(胃癌抗原蛋白Ga50)Anti-CCR4 AntibodyCD15分子(CD15)ELISA試劑盒
轉(zhuǎn)基因大豆MON87708品系檢測試劑盒(熒光-PCR法)人色素P450家族成員1B1(CYP1B1)酶聯(lián)念珠吸附測定試劑盒 Human MAP7 ELISA Kit共濟(jì)失調(diào)蛋白7樣1抗體
人念珠球蛋白E Fc段受體II(FcεR II)酶聯(lián)念珠吸附測定試劑盒 Human MAN2B2 ELISA Kit孤獨(dú)癥易感基因2蛋白抗體(自閉癥相關(guān)蛋白1)
人胎球蛋白A(FETUA)酶聯(lián)念珠吸附測定試劑盒 Human MANBAL ELISA Kit脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)2型蛋白抗體
人纖維蛋白原γ(FGγ)酶聯(lián)念珠吸附測定試劑盒Human MAP7 ELISA Kit芳香基硫酸酯酶H抗體
人脂筏特征蛋白2(FLOT2)酶聯(lián)念珠吸附測定試劑盒 Human MAP4K5 ELISA Kit溴區(qū)結(jié)構(gòu)域相鄰鋅指蛋白1A抗體
人糖盞蛋白(GC)酶聯(lián)念珠吸附測定試劑盒Human MANEA ELISA Kit載脂蛋白1抗體
人OJ抗體/抗異亮氨酰tRNA合成酶抗體(OJ/IleRS)酶聯(lián)念珠吸附測定試劑盒 Human MAP4K3 ELISA Kit突觸融合結(jié)合蛋白6抗體
設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3’端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn),被擴(kuò)增的靶序列zui有適宜的酶切位點(diǎn),這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
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