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產(chǎn)品名稱
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規(guī)格
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貨號
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小鼠骨髓瘤細(xì)胞
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1×106
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BH-X019694
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培養(yǎng)方法
傳代方法 將舊培養(yǎng)液吸除,PBS清洗兩遍后,加入6mL(/100mm皿)胰酶,在顯微鏡下觀察,期間禁止搖晃培養(yǎng)皿,細(xì)胞剛有脫落時,則吸除大部分胰酶,留約0.5mL,移至培養(yǎng)箱消化,約2min取出。傳代用12mL CM1-1培養(yǎng)液終止消化,輕輕吹打均勻細(xì)胞,后可分3~6皿培養(yǎng);
生長條件 37℃,5%CO2,CM1-1培養(yǎng)液。CM1-1培養(yǎng)液:90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H:DMEM高糖培養(yǎng)液,含谷氨酰胺,含丙酮酸鈉。
存儲條件 凍存則用6mL凍存液(90%FBS+10%DMSO)終止消化,吹打均勻,分為6支凍存管,用程序降溫盒于-80℃凍存,過夜轉(zhuǎn)移至液氮中保存。
培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及細(xì)胞化學(xué)檢測。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃**,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
細(xì)胞培養(yǎng)方法:
1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
Entrez Gene: 4982 Human
Omim: 602643 Human
SwissProt: O00300 Human
Unigene: 81791 Human
護(hù)骨素又稱護(hù)骨因子(osteorotegenin,OPG)、骨保護(hù)蛋白、破骨細(xì)胞**抑制因子、骨保護(hù)素、破骨細(xì)胞抑制**因子(osteoclastogenesis inhibitory factor,OCIF)
OPG屬于TNF受體超家族,主要功能是抑制破骨細(xì)胞的分化、成熟破骨細(xì)胞的骨吸收活性,并誘導(dǎo)其凋亡。
英文名稱 Anti-OPGL/RANKL/ODF
中文名稱 骨保護(hù)蛋白配體抗體(破骨細(xì)胞分化因子)
別 名 CD254; hRANKL2; ODF; OPGL; Osteoclast differentiation factor; Osteoprotegerin ligand; RANKL; Receptor activator of nuclear factor kappa B ligand; sOdf; SOFA; TNF related activation induced cytokine; TNFSF 11; TNFSF11; TRANCE; Tumor necrosis factor ligand superfamily member 11; Osteoprotegerin Ligand; TNF11_HUMAN.
濃 度 1mg/1ml
規(guī) 格 0.1ml/100μg 0.2ml/200μg
抗體來源 Rabbit
克隆類型 polyclonal
交叉反應(yīng) Human, Mouse, Rat, Dog
產(chǎn)品類型 一抗
研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 學(xué) 發(fā)育生物學(xué)
蛋白分子量 predicted molecular weight: 35kDa
性 狀 Lyophilized or Liquid
小鼠骨髓瘤細(xì)胞可溶性MHC-I鏈相關(guān)基因B檢測試劑盒丁香酚 ≥98%, FCC, Kosher, FG鈴蘭 97%
可溶性OX40配體檢測試劑盒丁香酚 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.5%(GC)丁香酚甲 98%
可溶性P選擇素檢測試劑盒丁香酚 natural, ≥98%, FCC丁香酚甲 ≥98%,FCC
可溶性sCD146分子檢測試劑盒月桂酸乙酯 99%甜瓜 80%
可溶性生激表達(dá)基因2蛋白檢測試劑盒辛酸乙酯 natural, ≥98%, FCC甲基柏木酮
可溶性Toll樣受體6檢測試劑盒戊酸乙酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.7% (GC)5-甲基-2-己酮 99%
可溶性T球蛋白粘蛋白分子3檢測試劑盒戊酸乙酯 ≥98%, FG4-甲 99%