大鼠肝癌細(xì)胞

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。

冷凍保存細(xì)胞之方法

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并 檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

細(xì)胞處理方法：

以下細(xì)胞處理方法及細(xì)胞說明書僅供參考，具體操作還需要根據(jù)到貨時(shí)細(xì)胞密度，細(xì)胞生長狀態(tài)等具體情況，酌情處理，如需要更詳細(xì)技術(shù)指導(dǎo)。

一．貼壁細(xì)胞

客戶接收到細(xì)胞，用75%的酒精（建議配制75%酒精的水是過的）培養(yǎng)瓶外部。

肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X ,200X 各一張）。

顯微鏡觀察細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞融匯至80%左右（可以傳代的情況下），細(xì)胞應(yīng)該在37度培養(yǎng)箱預(yù)溫1-2h后再做處理。如未達(dá)到細(xì)胞傳代密度，培養(yǎng)瓶應(yīng)預(yù)留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。

將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。

用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細(xì)胞,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。1000rpm,5min離心，重懸細(xì)胞。換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃,5%CO2  培養(yǎng)。

二．懸浮細(xì)胞

1. 接收到細(xì)胞，用75%的酒精（建議配制75%酒精的水是過的）培養(yǎng)瓶外部。

2. 肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X ,200X 各一張）。

3. 嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。

4. 將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒）。

5. 1000rpm,5min離心，重懸細(xì)胞。 換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和新鮮培養(yǎng)基，37℃,5%CO2培養(yǎng)。

純化方法  affinity purified by Protein A

儲(chǔ) 存 液  0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide

產(chǎn)品應(yīng)用   WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  IF=1:100-500

（石蠟切片需做抗原修復(fù)）

 not yet tested in other applications.

 optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.  

保存條件  Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.

Important Note  This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.

產(chǎn)品介紹 Chicken Ovalbumin is the major protein in the "white" of the egg (and a favorite antigen in immunological research). Egg white contains a variety of proteins including ovalbumin, conalbumin, ovomucoid and lysozyme. It belongs to the serpin family and the Ov serpin subfamily. Ovalbumin can cause an allergic reaction in humans.

Ovalbumin has been implicated in the development of the egg shell. Immunohistochemistry revealed that ovalbumin is found only in the mammillary bodies of decalcified shell, and is not distributed throughout the shell matrix. These results indicate that ovalbumin is present during the initial phase of shell formation and becomes incorporated into the protein matrix of the mammillary bodies. However, it is not yet clear whether ovalbumin at this site plays a specific role in shell mineralisation.

英文名稱  Anti-CD200R/Orexin receptor

中文名稱  丘腦分泌素受體抗體（食欲素受體）

別    名  HCRTR 1; HCRTR1; HCRTR-1; Orexin receptor 1; Hypocretin receptor type 1; Orexin receptor type 1; OX1R; CD200R; HCRTR2; Hypocretin (orexin) receptor 2; Hypocretin receptor 2; Hypocretin receptor type 2; Orexin receptor 2; OX2R.  

濃    度  1mg/1ml

規(guī) 格  0.1ml/100μg  0.2ml/200μg

抗體來源  Rabbit  

克隆類型  polyclonal

交叉反應(yīng)  Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit
大鼠肝癌細(xì)胞亮氨酸腦啡肽檢測(cè)試劑盒十四酸 Standard for GC，≥99.5% (GC)銅鐵試劑 AR,98.0%

磷酸苷油酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒十四酸 98%銅鐵試劑 CP,95.60%

磷酸果糖激酶檢測(cè)試劑盒十四酸 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥99.5% (GC銅鐵試劑 SU,98.00%

磷酸化AKT蛋白檢測(cè)試劑??十四酸 ≥98%,FCC, FG丁酸鈉 98%

磷酸化IκB激酶-α檢測(cè)試劑盒十四酸 ≥99%(GC)丁酸鈉 99%（GC），用于生物學(xué)

磷酸化N-甲基-D-天冬氨酸檢測(cè)試劑盒苯甲酸甲酯 AR,98%鄰苯二甲 ≥99%

磷酸化α-氨基羥甲基惡唑酸檢測(cè)試劑盒苯甲酸甲酯 99%鄰苯二甲 99%