狗腎轉(zhuǎn)化細胞

實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法； 

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃**，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率； 

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

培養(yǎng)方法

傳代方法 將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，細胞剛有脫落時，則吸除大部分胰酶，留約0.5mL，移至培養(yǎng)箱消化，約2min取出。傳代用12mL CM1-1培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打均勻細胞，后可分3~6皿培養(yǎng)；

生長條件 37℃，5%CO2，CM1-1培養(yǎng)液。CM1-1培養(yǎng)液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培養(yǎng)液，含谷氨酰胺，含丙酮酸鈉。

存儲條件 凍存則用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過夜轉(zhuǎn)移至液氮中保存。

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培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）； 

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時； 

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及細胞化學(xué)檢測。 

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

英文名稱  Anti-PTCHD2/DISP3

中文名稱  多通道膜蛋白PTCHD2抗體

別    名  DISP3; Dispatched, drosophila, homolog of, 3; G630052C06Rik; hCG_24779; KIAA1337; Patched domain-containing protein 2; Protein dispatched homolog 3; Ptchd2; PTHD2_HUMAN; RGD1305820; RND-type protein RNDEu-2; RNDEu-2; patched domain containing 2; RP23-157B15.1.

濃    度  1mg/1ml

規(guī) 格  0.2ml/200μg

抗體來源  Rabbit  

克隆類型  polyclonal

交叉反應(yīng)  Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse

產(chǎn)品類型  一抗    

研究領(lǐng)域  腫瘤 心血管 細胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 通道蛋白 新陳代謝 細胞膜蛋白  

蛋白分子量  predicted molecular weight: 153 kDa

性    狀  Lyophilized or Liquid

免 疫 原  KLH conjugated synthetic peptide derived from Human PTCHD2/DISP3

亞    型  IgG

純化方法  affinity purified by Protein A

儲 存 液  Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4

產(chǎn)品應(yīng)用   WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  Flow-Cyt=1:100-500  ICC=1:100-500  IF=1:100-500

（石蠟切片需做抗原修復(fù)）
狗腎轉(zhuǎn)化細胞肽聚糖檢測試劑盒四氫糠 99%6-羥基-2-吡啶羧酸 97%

碳酸酐酶2檢測試劑盒四甲基溴化銨 ARN-(2-羥乙基)哌 98%

碳酸酐酶9檢測試劑盒甲苯二異酸酯 98%（劇品）2-羥基苯酸 97%

碳酸酐酶Ⅵ檢測試劑盒甲苯二異酸酯 Standard for GC（劇品）2-羥基 99%

羰基化蛋白檢測試劑盒苯硫酚 99%（劇品）2-基苯酚 95%

糖聚糖檢測試劑盒四甲基溴化銨 離子對色譜級，≥99.0% (AT)(R)-(-)-5-羥甲基-2-吡咯烷酮 99%

糖化血紅蛋白A1c檢測試劑盒四甲基溴化銨 ACS, ≥98.0%(S)-(+)-5-羥甲基-2-吡咯烷酮 98%