實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃**,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品名稱
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規(guī)格
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貨號
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狗腎轉(zhuǎn)化細胞
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1×106
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BH-X019755
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培養(yǎng)方法
傳代方法 將舊培養(yǎng)液吸除,PBS清洗兩遍后,加入6mL(/100mm皿)胰酶,在顯微鏡下觀察,期間禁止搖晃培養(yǎng)皿,細胞剛有脫落時,則吸除大部分胰酶,留約0.5mL,移至培養(yǎng)箱消化,約2min取出。傳代用12mL CM1-1培養(yǎng)液終止消化,輕輕吹打均勻細胞,后可分3~6皿培養(yǎng);
生長條件 37℃,5%CO2,CM1-1培養(yǎng)液。CM1-1培養(yǎng)液:90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H:DMEM高糖培養(yǎng)液,含谷氨酰胺,含丙酮酸鈉。
存儲條件 凍存則用6mL凍存液(90%FBS+10%DMSO)終止消化,吹打均勻,分為6支凍存管,用程序降溫盒于-80℃凍存,過夜轉(zhuǎn)移至液氮中保存。
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培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及細胞化學(xué)檢測。
細胞培養(yǎng)方法:
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
英文名稱 Anti-PTCHD2/DISP3
中文名稱 多通道膜蛋白PTCHD2抗體
別 名 DISP3; Dispatched, drosophila, homolog of, 3; G630052C06Rik; hCG_24779; KIAA1337; Patched domain-containing protein 2; Protein dispatched homolog 3; Ptchd2; PTHD2_HUMAN; RGD1305820; RND-type protein RNDEu-2; RNDEu-2; patched domain containing 2; RP23-157B15.1.
濃 度 1mg/1ml
規(guī) 格 0.2ml/200μg
抗體來源 Rabbit
克隆類型 polyclonal
交叉反應(yīng) Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse
產(chǎn)品類型 一抗
研究領(lǐng)域 腫瘤 心血管 細胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 通道蛋白 新陳代謝 細胞膜蛋白
蛋白分子量 predicted molecular weight: 153 kDa
性 狀 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from Human PTCHD2/DISP3
亞 型 IgG
純化方法 affinity purified by Protein A
儲 存 液 Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4
產(chǎn)品應(yīng)用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 Flow-Cyt=1:100-500 ICC=1:100-500 IF=1:100-500
(石蠟切片需做抗原修復(fù))
狗腎轉(zhuǎn)化細胞肽聚糖檢測試劑盒四氫糠 99%6-羥基-2-吡啶羧酸 97%
碳酸酐酶2檢測試劑盒四甲基溴化銨 ARN-(2-羥乙基)哌 98%
碳酸酐酶9檢測試劑盒甲苯二異酸酯 98%(劇品)2-羥基苯酸 97%
碳酸酐酶Ⅵ檢測試劑盒甲苯二異酸酯 Standard for GC(劇品)2-羥基 99%
羰基化蛋白檢測試劑盒苯硫酚 99%(劇品)2-基苯酚 95%
糖聚糖檢測試劑盒四甲基溴化銨 離子對色譜級,≥99.0% (AT)(R)-(-)-5-羥甲基-2-吡咯烷酮 99%
糖化血紅蛋白A1c檢測試劑盒四甲基溴化銨 ACS, ≥98.0%(S)-(+)-5-羥甲基-2-吡咯烷酮 98%