樣品制備:
1). 直接或稀釋使用清亮無色中性液體樣品,體積可達(dá)2.000ml。
2). 過濾混濁溶液。
3). 除去樣品中的CO 2 (通過過濾)。
4 ). 通過加氫氧化鉀或氫氧化鈉將酸性樣品的PH值調(diào)至8.0。
5 ). 調(diào)整酸性淺色樣品的PH值至8.0,孵育約15分鐘。
6 ). 用空白樣品做對照測定有色樣品(如有必要調(diào)整PH值至8.0)。
7 ). 用PVPP( 聚乙烯吡咯烷酮)或聚酰胺處理深色未經(jīng)稀釋或體積更大的樣品。
8 ). 壓碎、攪勻固體或半固體樣品,用水溶解提取。
9 ). 用Carrez試劑將含有蛋白質(zhì)的樣品去蛋白。
10).含脂肪的樣品用熱水提取。
產(chǎn)品名稱
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二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)
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規(guī)格
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0.2g或者0.2mL
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貨號
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BH-S013749
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【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失,請仔細(xì)閱讀購買說明!
通用規(guī)則:
1、洗液不夠時,可用蒸餾水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液,加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。
2、液體全部加完后,可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動30秒,混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動功能。
3、底物有一定的毒性,終止液對皮膚有腐蝕性,應(yīng)盡量避免接觸。
4、檢測前,要打開酶標(biāo)儀,使之穩(wěn)定10分鐘以上。
5、吸取液體時,要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。
6、將液體加到酶標(biāo)孔中時,避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,液滴會自然流下去。
7、溫浴時,要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板,防止水分的蒸發(fā)。
8、洗板時,每次洗液加入后,應(yīng)靜置1分鐘,使清洗更加徹底。沒有洗板機時,倒去液體后,要將酶標(biāo)板在報紙或毛紙上用力拍干。
9、用槍吸取液體時速度不能太快,以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。
10、底物是光敏感的,要在臨用前現(xiàn)配。
優(yōu)點如下:
1、快速簡便:全程約50分鐘,可測100例左右樣本。
2、取樣量微:本法取手指或耳垂等末梢血20ul~50ul即可測紅細(xì)胞中的SOD,只需2ml靜脈血可測白細(xì)胞中的SOD及血小板中SOD,只需50mg左右組織就可測組織勻漿、胞漿中的SOD,0.2g組織可測線粒體及微粒體中的SOD。
3、靈敏度高:IC50=0.05g/ml,是鄰苯三酚法的18倍。
4、穩(wěn)定性好:試劑盒2~8℃存放6個月有效。
5、再現(xiàn)性好:變異系數(shù)CV=1.7%。
6、回收試驗: X =103.3%。
7、受外界影響因素?。焊蓴_因素少,重復(fù)性強。
8、測試面廣:可測動物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細(xì)胞、植物組織、各種水產(chǎn)以及化妝品、保健品等,效果均佳.
測定步驟:
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準(zhǔn)確
3.管底加樣,不能加在管壁上
4.加樣時不能產(chǎn)生氣泡
2.溫浴
1.加標(biāo)本后和加結(jié)合物后,應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫度的水浴箱。
2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。
3.為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后,反應(yīng)的時間和溫度通常不做嚴(yán)格要求。 如室溫高于20℃,ELISA板可避光放在實驗臺上,以便不時觀察,待對照管顯色適當(dāng)時,即可終止酶反應(yīng)。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過程中不是反應(yīng)步驟,但卻是決定實驗成敗的關(guān)鍵。
2.目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
4.讀板
1.陰性對照顏色極淺,在定性測定中一般可采用目視比色。
2.如用酶標(biāo)儀測定結(jié)果,準(zhǔn)確性決定于ELISA板底的平整與透明度、酶標(biāo)儀的質(zhì)量和軟件的算法。
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