基礎(chǔ)細胞培養(yǎng)基(Basal medium)主要包括199、MEM、RPMI-1640、DMEM、DMEM/F12等。主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無機鹽和其它一些輔助物質(zhì)。人工合成培養(yǎng)基使用時還需添加一定量的血清使細胞生長和繁殖。
1、L-谷氨酰胺 (L-Glutamine):是細胞生長的必須氨基酸,為培養(yǎng)的細胞提供重要的能量來源。脫掉氨基后,L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細胞的能量來源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時間后會降解,降解率隨保存溫度而變。L-谷氨酰胺的降解導致氨的形成,而氨對于一些細胞具有毒性。
2、GLutaMAX:即谷丙氨酸二肽,部分培養(yǎng)基中會使用L-丙氨酰-L-谷氨酰胺二肽來代L-谷氨酰胺,此二肽在水溶液中極為穩(wěn)定,可以在儲存、孵育和長期培養(yǎng)過程中防止L-谷氨酰胺的降解和氨的積累 。
3、丙酮酸鈉:丙酮酸鈉可以作為細胞培養(yǎng)中的替代碳源,盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,但是,如果沒有葡萄糖的話,細胞也可以代謝丙酮酸鈉。
4、 HEPES:HEPES (4-羥乙基哌嗪乙磺酸)是一種常用的兩性離子緩沖液,在37℃下的pKa為7.3 。由于培養(yǎng)中細胞的生長和代謝會導致培養(yǎng)基的環(huán)境pH值發(fā)生劇烈變化,因此,為了維持可以穩(wěn)定培養(yǎng)細胞的環(huán)境,通常,大多數(shù)細胞的佳培養(yǎng)環(huán)境是pH7.2-7.4,HEPES的緩沖范圍恰好在pH6.8-8.2內(nèi),這對于細胞培養(yǎng)是有利的。與其他緩沖液 (例如PBS (磷酸鹽緩沖鹽水)和TRIS)相比,HEPES在維持細胞培養(yǎng)基的pH值方面具有更高的穩(wěn)定性。
5、 酚紅:酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值的指示劑,用以持續(xù)監(jiān)測培養(yǎng)液的酸堿度,在低PH值時酚紅使培養(yǎng)液呈黃色,而較高的PH值時使培養(yǎng)液呈紫色,PH值7.2~7.4時為紅色,適合細胞培養(yǎng)。但酚紅也有一些缺點,研究表明酚紅可以模擬固醇類激 素 (特別是雌激 素)的作用,因此在用到雌激 素敏感的細胞時 (如乳腺組織),好使用不含酚紅的培養(yǎng)基。酚紅會干擾流式細胞分析時候的檢測。此外,一些無血清培養(yǎng)基的配方中若存在酚紅會干擾鈉-鉀平衡。