操作要點:
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內(nèi)完全解凍,使細胞能盡快通過*易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi),補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
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產(chǎn)品名稱
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規(guī)格
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貨號
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兔海馬神經(jīng)元細胞
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詳見說明書
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FS-016484
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細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
主要功能:
(1)血管平滑肌細胞的再生能力是原發(fā)血管病變的重要因素。
(2)表達鈣通道及ICAM-1和VCAM-1,參與血管壁的炎癥反應。
(3)與血管的進展和穩(wěn)定有關。
生理變化:
(1)主動脈硬化。
(2)主動脈瘤
(3)主動脈鈣化。
基本特性:
(1)組織來源于正常大鼠大動脈組織。
(2)鑒定:肌動蛋白,alpha-SMA和Desmin熒光染色。
(3)原代細胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
(4)每凍存管細胞數(shù):>5×105 cells/1ml。
(5)肌動蛋白,alpha-SMA和Desmin熒光染色驗證。
(6)不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、酵母。
培養(yǎng)步驟:
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
蛋白質(zhì)電泳分子量標準(蛋白marker 43.0-200.0 KD) Columbia blood medium
pUG6(60908-6860) pALEX a,b,c
Sodium Phosphate Buffer(磷酸鈉緩沖液),0.2M,pH7.2 人生長釋放多肽(GHRP) ELISA Kit
人基質(zhì)金屬蛋白酶4(MMP-4)ELISA Kit SUP-B15 [SUPB15]細胞株
大腸桿JM105種 pKO-9(pKO9)
pFLAG-ATS(pFLAGATS) pKillerRed-C(pKillerRedC)
小鼠特異生長因子/相關因子(TSGF)ELISA Kit 鹽酸四環(huán)素干粉
克必隆G載體 人注意缺陷多巴胺載脂蛋白基因多態(tài)PCR檢測試劑盒
pPV33-H(pPV33H) 10uL RNAase-free白吸頭(盒裝已滅長尖)
Potassium Chloride Solution(溶液),5M L3618
人白介素1可溶受體Ⅰ(IL-1sRⅠ)ELISA Kit 人抗流行熱病毒抗體IgM (EHF)ELISA Kit
Semisolid brucella broth 人尿游離皮質(zhì)醇(UFC)ELISA Kit
pEarleyGate 304(pEarleyGate304) NBLE細胞株
兔海馬神經(jīng)元細胞奈福泮 英文名稱:Nefopam hydrochloride 規(guī)格:???100mg 保存::-20℃,避光
咪唑 英文名稱:Levamisole hydrochloride 規(guī)格::50mg 保存::-20℃,避光
異丙 英文名稱:Isoproterenol hydrochloride 規(guī)格::50mg 保存::-20℃,避光
乙胺丁 英文名稱:Ethambutol hydrochloride 規(guī)格::100mg 保存::-20℃,避光
哌唑嗪 英文名稱:Prazosin hydrochloride 規(guī)格::50mg 保存::-20℃,避光
雷尼替丁 英文名稱:Ranitidine hydrochloride 規(guī)格::100mg 保存::-20℃,避光
氟奮乃靜 英文名稱:Fluphenazine hydrochloride 規(guī)格::50mg 保存::-20℃,避光
地爾硫 英文名稱:Diltiazem hydrochloride 規(guī)格::100mg 保存::-20℃,避光
丙咪嗪 英文名稱:Imipramine hydrochloride 規(guī)格::50mg 保存::-20℃,避光
芐絲 英文名稱:Benserazide Hydrochloride 規(guī)格::100mg 保存::-20℃,避光
西咪替丁 英文名稱:Cimetidine 規(guī)格::200mg 保存::-20℃,避光
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