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產(chǎn)品名稱
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規(guī)格
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貨號(hào)
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兔神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞
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詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
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FS-016514
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細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
主要功能:
(1)血管平滑肌細(xì)胞的再生能力是原發(fā)血管病變的重要因素。
(2)表達(dá)鈣通道及ICAM-1和VCAM-1,參與血管壁的炎癥反應(yīng)。
(3)與血管的進(jìn)展和穩(wěn)定有關(guān)。
生理變化:
(1)主動(dòng)脈硬化。
(2)主動(dòng)脈瘤
(3)主動(dòng)脈鈣化。
基本特性:
(1)組織來(lái)源于正常大鼠大動(dòng)脈組織。
(2)鑒定:肌動(dòng)蛋白,alpha-SMA和Desmin熒光染色。
(3)原代細(xì)胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
(4)每?jī)龃婀芗?xì)胞數(shù):>5×105 cells/1ml。
(5)肌動(dòng)蛋白,alpha-SMA和Desmin熒光染色驗(yàn)證。
(6)不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、酵母。
培養(yǎng)步驟:
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
pLVX-Tet-Off Advanced(pLVXTetOffAdvanced)
氯溶液
人細(xì)小病毒B19PCR檢測(cè)試劑盒
1000uL RNAase-free藍(lán)吸頭(袋裝帶芯)
L3572
人凝血酶抗凝血酶復(fù)合物(TAT)ELISA Kit
NCI-H1650 [NCIH1650]細(xì)胞株
pIRES2-ZsGreen1(pIRES2ZsGreen1)(60908-4265y)
多聚甲醛
非蛋白型Western封堵液
pSE380 (60908-6080)
fKN 16(fKN16)
人窖蛋白(Cav-1)ELISA Kit
兔神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞異去氫鉤藤堿;異柯諾辛因堿 英文名稱:Isocorynoxeine; ISO corynoxeine 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
q酮 英文名稱:Q ketone 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
蟲(chóng)草素;蟲(chóng)草素 英文名稱:Cordycepin; cordycepin 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
1,2,3,4,6-O-五沒(méi)食子酰葡萄糖 英文名稱:1,2,3,4,6-O- five galloyl glucose 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
瑞香素;祖師麻甲素 英文名稱:Daphnetin; master Ma Jiasu 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
金雞納堿;奎寧 英文名稱:Cinchona alkaloids quinine; 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
蟛蜞菊內(nèi)酯 英文名稱:Wedelolactone 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
三白草酮 英文名稱:Three white grass ketone 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
鼠尾草酚;鼠尾草苦內(nèi)脂 英文名稱:Carnosol; sage oxymatrine 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
鼠尾草酸 英文名稱:Carnosic acid 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
澤瀉A 英文名稱:Alisol A 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
操作要點(diǎn):
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒???,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動(dòng)凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍,使細(xì)胞能盡快通過(guò)*易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。
5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
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