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產(chǎn)品名稱
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規(guī)格
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貨號(hào)
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兔視網(wǎng)膜mulller細(xì)胞
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詳見說明書
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FS-016520
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細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
主要功能:
(1)血管平滑肌細(xì)胞的再生能力是原發(fā)血管病變的重要因素。
(2)表達(dá)鈣通道及ICAM-1和VCAM-1,參與血管壁的炎癥反應(yīng)。
(3)與血管的進(jìn)展和穩(wěn)定有關(guān)。
生理變化:
(1)主動(dòng)脈硬化。
(2)主動(dòng)脈瘤
(3)主動(dòng)脈鈣化。
基本特性:
(1)組織來源于正常大鼠大動(dòng)脈組織。
(2)鑒定:肌動(dòng)蛋白,alpha-SMA和Desmin熒光染色。
(3)原代細(xì)胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
(4)每凍存管細(xì)胞數(shù):>5×105 cells/1ml。
(5)肌動(dòng)蛋白,alpha-SMA和Desmin熒光染色驗(yàn)證。
(6)不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、酵母。
培養(yǎng)步驟:
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
雞17羥皮質(zhì)類固醇(17-OHCS)ELISA Kit
Methanosalsum natronophilum medium
pCMV-3Tag-3C(pCMV3Tag3C)
兔環(huán)磷酸腺苷(cAMP)ELISA Kit
SGC-7901/DDP細(xì)胞株
pPD95_18(pPD9518)
Cook 甲基綠派洛寧提純法核酸染色試劑盒
大鼠抗酒石酸酸磷酸酶5b(TRACP-5b)ELISA Kit
Desulfuromonas sp. Medium
pBD8
人氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)ELISA Kit
柱式凝固血液DNAout
pMCSG52 (linearized)
兔視網(wǎng)膜mulller細(xì)胞環(huán)氧續(xù)隨子 英文名稱:Epoxy lathyrol 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
遠(yuǎn)志酸 英文名稱:Polygalacic acid 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
遠(yuǎn)志皂苷元 英文名稱:Tenuigenin 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷;細(xì)葉遠(yuǎn)志皂甙 英文名稱:Tenuifolin; tenuifolin 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
遠(yuǎn)志山酮;遠(yuǎn)志口山酮 英文名稱:Polygala Polygala xanthone xanthone; 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
甘松新酮;苷松新酮 英文名稱:Nardosinone; Song Xin ketone glucoside 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
葫蘆素B;葫蘆苦素B 英文名稱:Cucurbitacin B; cucurbitacin B 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
葫蘆素D;葫蘆苦素D 英文名稱:Cucurbitacin D; cucurbitacin D 規(guī)格::HPLC≥98% 10mg/支 保存::-20℃,避光
葫蘆素E;葫蘆苦素E 英文名稱:Cucurbitacin E; cucurbitacin E 規(guī)格::HPLC≥98% 10mg/支 保存::-20℃,避光
香葉木素 英文名稱:Diosmetin 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
羌活 英文名稱:Notopterygium alcohol 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
操作要點(diǎn):
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個(gè)15mL??菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動(dòng)凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍,使細(xì)胞能盡快通過*易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。
5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)觀察細(xì)胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
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