實(shí)時(shí)定量PCR反應(yīng)試驗(yàn)結(jié)果處理:
1、如果有標(biāo)準(zhǔn)曲線,按照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算。
2、一般都是相對(duì)量,則用delta delta CT方法來計(jì)算。
3、舉例如下:對(duì)照組基因A的CT值為20, 內(nèi)參(比如βactin)CT值15。實(shí)驗(yàn)組基因A CT值18,內(nèi)參CT值14。
4、首先算加樣量:delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是說實(shí)驗(yàn)組的加樣量是對(duì)照組的2倍?;駻: delta CT=20-18=2。2的2次方是4。也就是說基因A的量在實(shí)驗(yàn)組是對(duì)照組的4倍。但是由于加樣量是2倍,所以4處以2=2,后的相對(duì)量是2倍。
5、幾點(diǎn)注意:必須確定擴(kuò)增的特異性,只有相同目標(biāo)的CT值才能相減(擴(kuò)增效率有可能不同),2的某次方只是理論值,實(shí)際擴(kuò)增效率低于2,不用Syber Green。