HRP的催化反應需要底物過氧化氫(H2O2)和供氫體(DH2)。供氫體多為無色的還原型染料，通過反應可**有色的氧化型染料(D)。酶促反應的過程如下:
HRP
DH2＋H2O2────→D＋2H2O
供氫體的種類很多，形成的產物特點不一。
DAB(3.3－二氨基聯(lián)苯胺)的反應產物為不溶性沉淀物，并有電子密度，故適宜于做免yi 酶染色或電鏡觀察。
5AS(5-氨基水楊酸)早期曾用于ELISA，但其溶解度不夠大，且空白孔不易控制到無色，現(xiàn)已很少應用。
OT(鄰聯(lián)甲苯胺)的特點是能產生鮮艷的藍綠色產物且靈敏度較高，但反應中受溫度影響較大，而且由于產物不穩(wěn)定，需要在短時間內進行測定。
目前用得較廣泛和較滿意的供氫體是：OPD(鄰苯二胺)和TMB(四甲基聯(lián)苯胺)。前者形成的產物為深桔黃色或棕色，后者產物為藍綠色，二者的可溶性均好，在避光處顏色穩(wěn)定，空白可近于無色，靈敏度上據報道后者比前者可高4倍以上。
另外，還有一種供氫體稱ABTS[2, 2'-邊氮基-雙(3-乙基苯并噻吡咯啉-6磺酸)]，其反應產物呈藍綠色，且靈敏度和穩(wěn)定性均好。尤其是在致癌的潛在可能性方面，ABTS與TMB皆是值得被優(yōu)選的供氫體。