細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
產(chǎn)品名稱
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CAKI-2細(xì)胞
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規(guī)格
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詳見說明書
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貨號
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BJ-100343
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服務(wù)描述:
公司提供委托細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù),細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評估體外模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:
客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。公司科技提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項(xiàng);3、公司科技售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:
客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細(xì)胞懸浮生長。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM
EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí), 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
注意事項(xiàng):
1. 接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精(建議配置75%的酒精的水是過的)。
3.嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
大鼠酸性成纖維細(xì)胞生長因子(aFGF/FGF-1)試劑盒 Rat acidic fibroblast
growth factor,aFGF/FGF-1 ELISA Kit 遠(yuǎn)志酸(標(biāo)準(zhǔn)品) Polygalacic acid 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
英文名稱RatEpithelialneuophilactivatingpeptide-78ELISAKit大鼠上皮中性粒細(xì)胞活化肽(ENA-78)規(guī)格:96T/48T 遠(yuǎn)志皂苷元(標(biāo)準(zhǔn)品) Senegenin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
環(huán)境無機(jī)0/游離0酸根離子比色法定量檢測試劑盒20 月桂烯(香葉烯) Myrcene 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥80%,標(biāo)準(zhǔn)品
ELISAKitTI-Ag人胸腺非依賴性抗原規(guī)格:48T/96T 蕓香柚皮苷(標(biāo)準(zhǔn)品) Narirutin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠骨鈣素(BGP)ELISA試劑盒 ,英文名: BGP ELISA Kit 澤瀉醇B醋酸酯(標(biāo)準(zhǔn)品) Alisol B 23-acetate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
大鼠高敏甲狀腺素(u-T4)ELISA檢測試劑盒RatUlasensitivityThyroxine,u-T4ELISAKit
96T/48T 獐牙菜苷(標(biāo)準(zhǔn)品) Sweroside 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
人膀胱癌抗原(UBC)試劑盒 Human urinary bladder
cancer aigen,UBC ELISA Kit 獐牙菜苦苷(標(biāo)準(zhǔn)品) Swertiamarin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
RatVitaminK1,VK1ELISAKit大鼠維生素K1(VK1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 樟腦(標(biāo)準(zhǔn)品) Camphor 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥96%,標(biāo)準(zhǔn)品
P16蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒5 芝麻林素(標(biāo)準(zhǔn)品) Sesamolin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Porcineierleukin10,IL-10ELISA試劑盒豬白介素10(IL-10)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 芝麻素 Sesamin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,BR
3131/3/1 Pristinamycin
IA 10mg
Cortex periplocae香加皮LAMP鑒定試劑盒
3131/3/1 Pristinamycin IA 10mM*1mLinDMSO Herba moslae香薷LAMP鑒定試劑盒
3131/3/1 Pristinamycin IA 1mg
Fructus citri香櫞LAMP鑒定試劑盒
3131/3/1 CAKI-2細(xì)胞 Pristinamycin IA 25mg
Cortex periplocae香加皮LAMP鑒定試劑盒
3131/3/1 Pristinamycin IA 5mg
Herba moslae香薷LAMP鑒定試劑盒
體表皮組織提取物【Skin: Normal
Human Epidermis Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 10μg/ 200μg
體視網(wǎng)膜組織提取物【Eye: Normal Human Retinal Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 10μg/ 200μg
體晶狀體組織提取物【Human Lens:Normal Lens Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 10μg/ 200μg
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