抗體的制備過程:
1. M Y原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為M Y原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對(duì)該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有M
Y原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. M Y動(dòng)物:常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量**時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. M Y血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. M Y血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析,具有高效,特異性強(qiáng),純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對(duì)分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. M Y血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會(huì)影響效價(jià),而真空干燥保存時(shí)間可以更久。保存前需經(jīng)并添加防腐劑。
產(chǎn)品名稱
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Anti-VEGF-A抗體
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規(guī) 格
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0.1ml/100μg
0.2ml/200μg
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貨號(hào)
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BJ-K95873
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英文名稱 Anti-VEGF-A
中文名稱 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A抗體
濃 度 1mg/1ml
規(guī) 格 0.1ml/100μg 0.2ml/200μg
抗體來源 Rabbit
克隆類型 polyclonal
別 名 Vascuoar
endothelial growth factor A; VEGF A; vascular endothelial growth factor A
isoform 2 precursor; Vegf; VEGFA; MGC70609; MVCD1; VEGF; VPF; VEGFA_HUMAN;
Vascular endothelial growth factor A; VEGF-A; Vascular permeability factor;
VPF; VEGF A Precursor.
交叉反應(yīng) Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Sheep, Guinea Pig,
Bovine, G
產(chǎn)品類型 一抗
研究領(lǐng)域 腫瘤 心血管 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 生長(zhǎng)因子和 血管內(nèi)皮細(xì)胞
蛋白分子量 predicted molecular weight: 24kDa
性 狀 Lyophilized or
Liquid
免 疫 原 KLH conjugated
synthetic peptide derived from human VEGFA
亞 型 IgG
純化方法 affinity purified by Protein A
儲(chǔ) 存 液 0.01M PBS, pH
7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide
產(chǎn)品應(yīng)用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500
IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500
對(duì)照/標(biāo)本無染色 產(chǎn)品僅用于科研
① 確認(rèn)是否忽略了應(yīng)該加的某種試劑,包括一抗、二抗、三抗及底物等。
② 確認(rèn)所有的試劑是否按正確的順序加入,是否孵育了足夠的時(shí)間。
③ 對(duì)照抗體的標(biāo)簽確認(rèn)是否使用了正確的抗體,以及所用的檢測(cè)系統(tǒng)是否和一抗匹配,這一點(diǎn)是非常重要的。比如,如果一抗是兔來源的抗體,二抗一定要用抗兔的二抗來匹配;或一抗是小鼠的IgM一抗,二抗必須是山羊/兔抗小鼠的IgM(不是IgG)二抗。
④ 檢查抗體所使用的稀釋度及稀釋溶液。
⑤ 檢查抗體的有效期和保存條件,尤其是標(biāo)記了酶或熒光素的抗體,現(xiàn)在大多數(shù)試劑公司的抗體均要求在4~8℃條件下保存,應(yīng)避免反復(fù)凍融,試劑保存時(shí)一定要避免與揮發(fā)性有機(jī)溶劑同放一室,以免降低抗體的效價(jià)。
⑥ 檢查標(biāo)本的儲(chǔ)存條件,好用已知陽性的標(biāo)本來同時(shí)做陽性對(duì)照。
⑦ 檢查色原/底物溶液,簡(jiǎn)單的檢測(cè)方法是將一滴標(biāo)記有酶的抗體加入到制備好的底物溶液中,如果底物發(fā)生預(yù)期的顏色變化,則可排除底物的因素。需要注意的是,有些底物在制成工作液后應(yīng)在一定時(shí)間內(nèi)用完,否則會(huì)失效。
⑧ 檢查沖洗液是否和反應(yīng)試劑匹配,溶液的pH值很重要,與過氧化物酶底物匹配的溶液中不應(yīng)含有疊氮鈉。
⑨ 檢查復(fù)染劑和封片劑是否和所使用的色原匹配。
弱陽性
如果陰性對(duì)照沒有染色而陽性對(duì)照標(biāo)本弱陽性,除了考慮上述因素外,還應(yīng)考慮:
① 標(biāo)本的固定方式,不當(dāng)?shù)墓潭ǚ绞交蚬潭〞r(shí)溫度過高,都會(huì)影響到所檢測(cè)的抗原的數(shù)量和質(zhì)量。
② 不適當(dāng)?shù)目乖迯?fù)方式,由于石蠟切片在制作的過程中固定劑對(duì)抗原的封閉作用,必須用抗原熱修復(fù)或酶消化或兩種同時(shí)使用的抗原雙暴露法,至于使用哪一種方法,應(yīng)參照**廠家的說明,同時(shí)結(jié)合標(biāo)本的具體情況而定。
③ 抗體的稀釋度是否過高或者孵育的溫度/時(shí)間是否正確。一般試劑**廠家都會(huì)對(duì)試劑給出一定的使用范圍,但是由于使用者的標(biāo)本來自各種組織,處理過程也不盡相同,所以應(yīng)參照使用范圍,對(duì)所使用的一抗進(jìn)行梯度測(cè)試,找出佳的使用濃度。
④ 切片上了過多的沖洗液,當(dāng)抗體加至切片上時(shí),等于人為地對(duì)抗體進(jìn)行了進(jìn)一步的稀釋。
⑤ 孵育時(shí)切片是否放置水平,否則會(huì)導(dǎo)致抗體流失。
如果陰性對(duì)照沒有反應(yīng),陽性對(duì)照反應(yīng)良好,而標(biāo)本弱陽性,則可能是由于陽性對(duì)照不是同一種咨詢組織、或固定方式不同等原因所致。
Anti-PAR-1/FITC 熒光素標(biāo)記蛋白酶激活受體-1抗體IgGMulti-class
antibodies規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-chi IgG/FITC 熒光素標(biāo)記羊抗雞IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.3ml
細(xì)胞色素P450 19抗體 anti-CYP19 0.2ml
Rabbit anti-mouse Kappa light chain/PE PE標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈 0.1ml
FANK1 英文名稱: HSD13蛋白抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Tuberin/TSC2(Ser540) 0酸化結(jié)節(jié)性硬化蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
Goat Anti-chi IgG/FITC 熒光素標(biāo)記羊抗雞IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.3ml
Anti-AFP/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記鼠抗人甲胎蛋白單克隆抗體(包被)IgGMulti-class
antibodies規(guī)格: 0.2ml
DVL1 (dishevelled 1) 蓬亂蛋白1Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
凝聚素α/β抗體 Anti-Apo J/Clusterin-α/β/Apolipoprotein J 0.1ml
ZNF537 英文名稱: 鋅指蛋白537抗體 0.2ml
DPCR1 英文名稱: DPCR1蛋白抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-Ep300 (Ser89) 0酸化轉(zhuǎn)錄接頭蛋白EP300抗體 規(guī)格 0.1ml
DVL1 (dishevelled 1) 蓬亂蛋白1Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-VEGF-A抗體兔趨化因子(rabbit Raes) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進(jìn)口分裝 5-Fluorouracil 中文名: 分子式:C4H3FN2O2
兔前列腺素F2aelisa試劑盒 兔前列腺素F2a試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 兔前列腺素F2a試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:兔前列腺素F2a試劑盒、兔前列腺素F2a elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。 5-Aminoindazole 19335-11-6 中文名:5-氨基吲唑 分子式:C7H7N3
兔前列腺素E2elisa試劑盒 兔前列腺素E2試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 兔前列腺素E2試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:兔前列腺素E2試劑盒、兔前列腺素E2 elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。 5-Aminofluorescein 中文名:5-氨基熒光素 分子式:C20H13NO5 度:98.0%
兔前列腺素E2(rabbit PGE2) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進(jìn)口分裝 5-Formyl-2-furylboronic acid 27329-70-0 中文名: 分子式:C5H5BO4
兔前列腺素E1elisa試劑盒 兔前列腺素E1試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 兔前列腺素E1試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:兔前列腺素E1試劑盒、兔前列腺素E1 elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。 5-Aminofluorescein 中文名:5-氨基熒光素 分子式:C20H13NO5
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