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上海智巖科學(xué)儀器有限公司
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DNA合成儀使用方法操作步驟
以亞磷酰胺寡核苷酸合成為例介紹該類儀器的一般操作步驟。亞磷酰胺DNA合成的試劑有:保護堿基的5/—DMT,A、G、C、T亞磷酰胺單體,四唑偶聯(lián)催化劑,乙酐,N—甲基咪唑封閉試劑,三***(TCA)脫保護溶液,12氧化混合物,乙腈清洗溶劑,氨水切除溶液。DNA合成儀使用方法操作步驟如下:
1)仔細檢查合成儀上所有試劑瓶中的試劑量,必要時換掉試劑瓶,特別注意乙腈的量,因為該溶劑用量較大。
2)將標(biāo)記好的清潔的收集瓶裝在合成儀上。
3)將要合成的DNA序列輸入合成儀。
4)檢查選擇的合成步驟是否正確。
5)選擇結(jié)束方法:TritylOffAuto是儀器的原始狀態(tài),若打算以5,—DMT基團連接純化寡核苷酸,將其轉(zhuǎn)變?yōu)門ritylOnAuto結(jié)束狀態(tài)。
6)選擇結(jié)束方法,一般為系統(tǒng)的原始狀態(tài)。
7)在每個柱監(jiān)視器的Username下,輸入你所希望的保存名字。
8)以代碼代替相應(yīng)的DNA序列標(biāo)記每一個收集瓶。
9)打印出每一個柱設(shè)置的詳細資料。
10)檢查打印出來的資料是否正確。
11)運行StartColumn步驟檢查每一個柱的位置,確保合成儀上合成柱處于正確的位置。
12)檢查連接在合成儀上的溶劑殘留(廢液瓶)是否充滿。
13)如果分部收集器用來收集每個DMT脫保護步驟的流出物,確保試管充分清潔干凈,并打開分部收集器,確保DMT廢液管路通向分部收集器。
14)啟動循環(huán),運行開始程序清洗試劑管路,除去原來的試劑。
注意:TritylOnAuto表示在合成寡核苷酸的5’端核苷酸帶有一個DMT,并將其從固相載體上切下來,儲存在收集瓶中;TritylOffAuto表示在合成寡核苷酸的5,端核苷酸沒有保護基團,將其從固相載體上切下來,儲存在收集瓶中;TritylOnManual表示合成寡核苷酸的5’端核苷酸帶有一個DMT,寡核苷酸沒有從固相載體上切下來,而是保留在合成柱中;TritylOffManual表示在合成寡核苷酸的5,端核苷酸沒有保護基團,寡核苷酸沒有從固相載體上切下來,而是保留在合成柱中。
上海智巖科學(xué)儀器有限公司
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DNA合成儀, 二手儀器, 儀器維修 , 氘燈, PCR儀, 生物儀器
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