1. 大腦與神經(jīng)元
人類大腦由大約100億個神經(jīng)元組成,神經(jīng)元之間通過突觸相互連接成復(fù)雜的功能網(wǎng)絡(luò),因而大腦是人體*復(fù)雜的器官。目前,人們對大腦的功能機(jī)制的認(rèn)知還停留在較低的水平,研究大腦的功能也成為科學(xué)家的**目標(biāo)。2013年1月,人腦工程成為歐盟“未來新興旗艦技術(shù)項(xiàng)目”之一,未來10年內(nèi)將獲得10億歐元的科研經(jīng)費(fèi)。隨后,奧巴馬宣布將從2014 財(cái)年的政府預(yù)算中拿出1億美元,啟???“人腦活動圖”項(xiàng)目研究(Brain Activity Map project)。這兩大腦科學(xué)研究計(jì)劃勢必將掀起神經(jīng)科學(xué)研究的熱潮。
神經(jīng)元,又稱神經(jīng)原或神經(jīng)細(xì)胞,是構(gòu)成神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和行使功能的基本單位。神經(jīng)元是具有長突起的細(xì)胞,它由細(xì)胞體(Soma)和細(xì)胞突起-軸突(Axon)和樹突(dendrite)構(gòu)成。
神經(jīng)元與神經(jīng)元之間會發(fā)生頻繁的信號傳遞與交互,從而構(gòu)成非常復(fù)雜的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)。神經(jīng)元之間的信號傳遞依賴于細(xì)胞膜上的離子通道(Ion channel)。離子通道的開閉會引起膜內(nèi)外離子的交換,如Na+/K+離子,從而引起膜電位的變化。所以說神經(jīng)元的信號傳遞會伴隨著電活動,當(dāng)達(dá)到一定閾值時,便可引發(fā)動作電位(Action potential)。檢測神經(jīng)元動作電位的發(fā)生變成為研究神經(jīng)活動的主要方法,比如傳統(tǒng)的膜片鉗技術(shù)。
2. 在體多通道記錄技術(shù)(in-vivo multichannel recording)
傳統(tǒng)的膜片鉗技術(shù)是一種離體的記錄方法(in-vitro),主要是針對離體培養(yǎng)的細(xì)胞和腦片進(jìn)行記錄,而且大多是單通道記錄,一次只能記錄一個細(xì)胞,通量不高。隨后發(fā)展出了MEA技術(shù),即Multi-Electrode Array,利用多電極陣列對細(xì)胞或腦片進(jìn)行記錄,這樣就變成了多通道記錄,解決了通量的問題。
然而,離體狀態(tài)下的記錄與動物的本來狀態(tài)還是相去甚遠(yuǎn),尤其是研究動物在某種活動狀態(tài)下的神經(jīng)活動更加是不能實(shí)現(xiàn)。所以在體或活體狀態(tài)的多通道記錄便是迫切需要。
在體多通道記錄(in-vivo multichannel recording)是在活體狀態(tài)下研究動物神經(jīng)活動的一種方法。將電極陣列植入動物的大腦某皮層或區(qū)域,電極后續(xù)接入高靈敏度的放大器及記錄系統(tǒng),將記錄到的模擬信號轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號,在配套的記錄軟件上變可以觀察到放電信號?,F(xiàn)在國際上已經(jīng)有非常成熟的用于在體多通道記錄的系統(tǒng)和產(chǎn)品,比如美國Neuralynx公司研發(fā)的DitgialLynx系統(tǒng),其高速的采樣率和A/D轉(zhuǎn)換率、超低的噪音、*高可達(dá)512通道、超大的記錄范圍、簡便易用的軟件等方面,給研究者在神經(jīng)科學(xué)研究方面帶來極大的幫助!
3. 在體多通道記錄的實(shí)驗(yàn)流程
在體多通道記錄主要包括動物手術(shù)、電極植入、信號記錄采集及數(shù)據(jù)分析等步驟。
(1)動物手術(shù):
以大小鼠為例,將實(shí)驗(yàn)動物麻醉,常用****鈉或水合氯醛靜脈注射的方法,有條件也可使用氣體麻醉。去除動物頭頂處的毛,將動物固定在腦立體定位儀上,然后將頭皮剪開,將組織清理干凈,露出頭骨,可以比較清晰的看見骨縫。利用骨縫進(jìn)行定位,確定電極植入的位置。
用顱骨鉆在顱骨開天窗,一般方形的窗比較常用。小心取下骨片,再在天窗對側(cè)腦區(qū)打下幾個螺釘孔,用來固定顱骨螺釘,一般打2至4個。用1ml注射器針頭小心去除硬腦膜,盡量避免出血。
(2)電極植入:
先固定顱骨螺釘,使得螺釘接觸到腦組織,但又不過分壓迫。用電極夾持器夾住電極,先定位在天窗上方,將電極的地線纏繞在顱骨螺釘上。講電極**緊挨腦組織表面。然后,用微推進(jìn)器緩慢向下推進(jìn)(建議使用高精度的電動微推進(jìn)器),使得電極進(jìn)入腦組織。注意推進(jìn)的速度,使電極緩慢到達(dá)想要記錄的腦區(qū)。
(3)信號記錄:
連接好記錄系統(tǒng),包括headstage,主機(jī),電腦等。打開記錄軟件,觀察放電信號。Neuralynx的DitgialLynx系統(tǒng)配備Cheetah采集軟件,可以同時顯示高頻Spike信號及低頻信號,如LFP/EEG/EMG,記錄原始的未濾波信號,可在軟件設(shè)置input range、filter、thresholds等參數(shù),操作簡單方便,界面友好。 待觀察到穩(wěn)定且信噪比較高的信號,便可開始記錄。在記錄同時還可以同時接入其他外源事件和刺激,如電刺激、光刺激。
除了麻醉狀態(tài)下記錄,還可以讓動物清醒狀態(tài)下進(jìn)行記錄。這樣便可結(jié)合動物行為學(xué),讓動物完成各種任務(wù)并同時進(jìn)行記錄。
(4)信號分析:
記錄好數(shù)據(jù)之后,便可進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。Neuralynx提供SpikeSort3D進(jìn)行Spike Sorting。Spike Sort 3D是一款用于Spike波形在線和離線的分類工具。它集成在Cheetah DAS 軟件中,同時也可以作為獨(dú)立的程序。在2D和3D界面中,使用者可以輕松的手動定義不同的放電聚類,清晰明了。Spike Sort 3D提供主成分分析PCA,并有多個特征值features可選,并提供Cluster quality measures-isolation distance和L-ratio。
Sorting之后,Neuralynx還提供NeuroExplorer進(jìn)行數(shù)據(jù)分析軟件。NeuroExplorer現(xiàn)在已經(jīng)是第四代版本,可以提供*完整的一套Spike分析方法。研究者可以從多個角度分析連續(xù)的信號數(shù)據(jù)和神經(jīng)元的數(shù)量。強(qiáng)大的內(nèi)置的腳本語言,讓許多分析工作的自動化,同時其開放式的分析環(huán)境,您可以使用其他程序來擴(kuò)展其功能。
NeuroExplorer可以讀取多種文件格式,包括許多流行的數(shù)據(jù)采集系統(tǒng),文本文件,Excel電子表格和MATLAB創(chuàng)建的數(shù)據(jù)文件。為了幫助出示您的分析結(jié)果,NeuroExplorer創(chuàng)建完全可編輯,達(dá)到出版質(zhì)量的表格和圖表。