哮 喘小鼠模型構(gòu)建:
1. 明礬致敏佐劑10%明礬溶液(溶于雙蒸水)2ml與500mg/mlOVA(溶于PBS)2ml等量混合后,用NAOH調(diào)PH值為6.5.室溫孵育60min,離心5min,去掉上清液,重溶于2mlBPS。致敏時(shí)每只老鼠腹腔注射200ul,其中含2mg明礬和100ugOVA
2. 致敏:小鼠分別于第0、14天是腹腔注射明礬致敏佐劑0.2ml,對(duì)照組注射相同劑量的PBS溶液,正常飲食飼養(yǎng)。
3. 激發(fā):霧化吸入,第21天時(shí)小鼠放入有機(jī)玻璃箱,5%OVA霧化吸入,每天30min。末次致敏后24h內(nèi)檢測(cè)。以小鼠出現(xiàn)煩躁不安、呼吸急促、腹腔痙攣等陽(yáng)性反應(yīng)作為造模成功的標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)照組采用PBS霧化吸入,其他操作均相同。
4. 末次激發(fā)24h麻醉小鼠,摘眼球取血,室溫靜置24h后于4℃3000r離心10min提取血清,放入-80℃冰箱凍存。取左肺組織于4%多聚甲醛溶液中固定用于病理染色;右肺組織液氮冷凍,-80℃保存用于分生標(biāo)本。
哮 喘小鼠模型特點(diǎn):哮 喘模型組小鼠在激發(fā)開(kāi)始后出現(xiàn)打噴嚏、點(diǎn)頭呼吸、呼吸急促、嘯鳴音、腹肌收縮、煩躁等典型哮 喘發(fā)作癥狀,并且后期觀察中發(fā)現(xiàn)飲食減少、毛色無(wú)光澤、行動(dòng)遲緩及體重逐漸下降。肺組織切片可進(jìn)行HE染色、MBP染色、剛果紅染色及EOS浸潤(rùn)等觀察小鼠肺部炎癥情況。主要測(cè)量其中的白細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞的數(shù)量。
比較醫(yī)學(xué):三種方法構(gòu)建哮 喘小鼠模型分別是HDM、OVA、TDI。 HDM、OVA所誘導(dǎo)的哮 喘小鼠BALF中細(xì)胞組分主要以嗜酸性粒細(xì)胞為主。三組哮 喘小鼠在接受不同濃度的霧化后氣道阻力明顯增高,與濃度呈正相關(guān),而HDM和OVA誘導(dǎo)的哮 喘小鼠氣道阻力較TDI更高。不同造模方式建立的哮 喘小鼠模型在氣道反應(yīng)性、氣道炎癥和病理特點(diǎn)各有不同,HDM和OVA哮 喘小鼠具有典型的嗜酸性粒細(xì)胞哮 喘表現(xiàn),而TDI 哮 喘小鼠表現(xiàn)為混合細(xì)胞性哮 喘動(dòng)物模型。