PCR定量試劑盒

產(chǎn)品特點(diǎn): 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高：有效避免非特異性擴(kuò)增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高：復(fù)孔間差異小，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性強(qiáng)
擴(kuò)增性能優(yōu)：擴(kuò)增效率高，熒光信號強(qiáng)

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)**的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。zui好設(shè)立一個專用的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。
86632-03-33,4,5-三咖啡?？鼘幩釓S家  3,4,5-Tricaffeoylquinic acid   組織PAK2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20

865-21-4長春堿規(guī)格  vinblastine   組織P38β2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20

865-21-4長春花堿說明書   Vinblastine   組織NEK2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20

861691-37-4葒草素-2"-0-B-L半乳糖苷說明書  2"-O-beta-L-galactopyranosylorientin   組織NADP依賴性甘油-3-1酸脫氫酶(NADP-Glyceraldehyde-3-PhosphateDehydrogenase;NADP-GAPDH)活性光譜法定量檢測試劑盒20

860-79-7黃楊堿廠家  Cyclovirobuxin D   組織NADPH氧化酶活性比色法定量檢測試劑盒20/50(10樣本)
小鼠組蛋白脫乙酰酶(HDAC1)ELISA試劑盒 ，英文名： HDAC1 ELISA Kit  1258-84-0扁塑藤素說明書  Pristimerin

小鼠纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)ELISA檢測試劑盒Mouseplasmin-aiplasmincomplex,PAPELISAKit 96T/48T  572-30-5扁蓄苷品牌  Avicularin

人抗氨酰NA合成酶,細(xì)胞質(zhì)(AARS)抗體試劑盒 Human ai alanyl-NA syhetase,cytoplasmic(AARS)aibody ELISA kit  表大戟二烯醇規(guī)格  Tirucallol

rabbitTissuePolypeptideAigen,TPAELISAKit兔子組織多肽抗原(TPA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1072-93-1表告依春廠家  epigoitrin

載玻片細(xì)胞CYTOCHROMEC蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20  490-46-0表兒茶素說明書  Epicatechin
Ratfibroblastgrowthfactor-10,FGF-10ELISA試劑盒大鼠成纖維細(xì)胞生長因子10(FGF-10)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  64439-81-210-羥基喜樹堿品牌  10-Hydroxycamptothecin

小鼠組織蛋白酶S(CTSS)ELISA試劑盒 ，英文名： CTSS ELISA Kit  13-去羥基印烏堿規(guī)格  13-Dehydroxyindaconintine

綿羊白介素1(IL-1)ELISA檢測試劑盒SheepIerleukin1,IL-1ELISAKit 96T/48T 473-08-5a-香附酮廠家  α-Cyperone

犬胰島素樣因子3(INSL3)試劑盒 Dog insulin-like 3,INSL3 ELISA Kit  50-99-7D-無水葡萄糖說明書  D(+)-Glucose

英文名稱MouseApelin-12ELISAKIT小鼠Apelin-12規(guī)格：96T/48T  10284-63-6D-松醇品牌  D-Pinitol
豬生長抑素受體5   英文名稱：   Porcine Somatostatin Receptor 5 Elisa Kit   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   SS5  Temozolomide  85622-93-1  中文名：替莫唑胺  分子式：C6H6N6O2 

豬生長抑素elisa試劑盒   豬生長抑素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豬生長抑素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬生長抑素試劑盒、豬生長抑素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。     Sitosteryl palmitate  2308-85-2  中文名：β-谷甾醇棕櫚酸酯  分子式：C45H80O2 

豬生長抑素(SS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Senkyunolide G  94530-85-5  中文名：洋川芎內(nèi)酯G  分子式：C12H16O3 

豬生長**釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝   cholate  中文名：膽酸鈉  分子式：C24H39NaO5  度：98.5%

豬生長**釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISAKit   ELISA.   96T/48T   prasterone sulfate  中文名：去氫表雄酮硫酸鈉鹽  分子式：C19H27NaO5S  度：98.0%
檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
PCR定量試劑盒在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

產(chǎn)品留言

標(biāo)題

聯(lián)系人

聯(lián)系電話

內(nèi)容

驗(yàn)證碼

點(diǎn)擊換一張

注：1.可以使用快捷鍵Alt+S或Ctrl+Enter發(fā)送信息!
2.如有必要,請您留下您的詳細(xì)聯(lián)系方式!