應(yīng)用于IHC、WB、 IF、IP、ELISA等實(shí)驗(yàn)，質(zhì)量保證，無(wú)效免費(fèi)退換，另外本公司長(zhǎng)期供應(yīng)化抗體、WB抗體、化試劑盒和抗體試???所需全部相關(guān)試劑、熒光標(biāo)記抗體、elisa抗體、單克隆抗體、多克隆抗體、各種標(biāo)記的二抗IgG/IgM/IgD/IgA等科研實(shí)驗(yàn)抗體。
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產(chǎn)品名稱
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規(guī)格
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貨號(hào)
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Anti-NOB1抗體
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0.2ml/200μg
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XG-01K85211
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英文名稱 Anti-NOB1
中文名稱 RNA結(jié)合蛋白NOB1抗體
濃 度 1mg/1ml
規(guī) 格 0.2ml/200μg
抗體來(lái)源 Rabbit
克隆類(lèi)型 polyclonal
交叉反應(yīng) Human, Mouse, Rat
產(chǎn)品類(lèi)型 一抗
研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 染色質(zhì)和核信號(hào) 結(jié)合蛋白 表觀遺傳學(xué)
蛋白分子量 predicted molecular weight: 47kDa
性 狀 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human NOB1
亞 型 IgG
純化方法 affinity purified by Protein A
儲(chǔ) 存 液 Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4
產(chǎn)品應(yīng)用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 ICC=1:100-500 IF=1:100-500
別 名 Adenocarcinoma antigen recognized by T lymphocytes 4; ART4; MST158; MSTP158; Nin one binding protein; NIN1/RPN12 binding protein 1 homolog (S. cerevisiae); nob1; NOB1_HUMAN; NOB1P; Phosphorylation regulatory protein HP-10; Protein ART-4; Protein ART4; PSMD8 binding protein 1; PSMD8BP1; RNA binding protein NOB1; RNA-binding protein NOB1.
稀釋方法：
方法1. 實(shí)驗(yàn)前，將凍干粉抗體用無(wú)菌蒸餾水稀釋?zhuān)ɑ騊BS稀釋?zhuān)瑢⑾♂尯蟮目贵w分裝5-10支（20ulx5支或10ulx10支），放入-20℃保存，用一支拿一支，避免反復(fù)凍溶。
方法2. 實(shí)驗(yàn)前,也可將凍干粉抗體用無(wú)菌蒸餾水稀釋50ul（或PBS稀釋50ul）成原液:再加50%甘油, 放入-20℃保存，用多少吸多少。
方法3. 預(yù)試驗(yàn)可做幾個(gè)梯度1：100、200、400背景高還可做上去，選一個(gè)好的稀釋比例，再正式做，工作液的稀釋-使用抗體稀釋液。
石蠟切片和冰凍切片的比較
(1)要求做冰凍切片的不一定能做石蠟切片，這是今天我向一老師請(qǐng)教得出的結(jié)論。因?yàn)樽魇炃衅瑫r(shí)要高溫烤片，可能會(huì)破壞組織的抗原 性，如果組織的抗原性較穩(wěn)定，則可作石蠟切片;但是要求做石蠟切片的，可作冰凍切片。
(2)冰凍切片的優(yōu)點(diǎn)是能夠較好的保存組織的抗原活性，做化 時(shí)不需抗原修復(fù)這一步。缺點(diǎn)是細(xì)胞內(nèi)易形成冰晶而破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，可能會(huì)使抗原彌散;切片厚度較石蠟的厚，做的片子沒(méi)石蠟的漂亮。當(dāng)你買(mǎi)一抗時(shí)，目錄上都寫(xiě)著做什么樣的切片，如果它寫(xiě)著只能做冰凍，就不能做石蠟，如寫(xiě)著兩者都可，那就都能做。
(3)石蠟切片的優(yōu)點(diǎn)可以保持組織細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，且容易存放在室溫，而冰凍切片比較麻煩，一定要存在-80度的低溫冰箱中，尤其是用來(lái)做原位雜交 的的切片，為了防止RNA降解，保存一貫很重要。由于石蠟切片可以切到4微米左右，所以原位雜交探針容易滲透到組織中去，容易成功，而且得到的顏色/形態(tài)都較冰凍切片好。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)：
1.產(chǎn)品名稱如在反應(yīng)混合液中有疊氮鈉或游離氨基存在,會(huì)抑制標(biāo)記反應(yīng)。因此,蛋白質(zhì)在反應(yīng)前要對(duì) 0.1mol/L碳酸氫鈉緩沖液或0.5mol/L硼酸緩沖液充分透析；
2.所用的NHSB及待生物素化蛋白質(zhì)之間的分子比按蛋白質(zhì)表面的ε-氨基的密度會(huì)有所不同,選擇不當(dāng)則影響標(biāo)記的效率,應(yīng)先用幾個(gè)不同的分子比來(lái)篩選適條件；
3.用NHSB量過(guò)量也是不利的,抗原的結(jié)合位點(diǎn)可能因此被封閉,導(dǎo)致抗體失活；
4.由于抗體的氨基不易接近可能造成生物素化不足,此時(shí)可加入去污劑如 Triton x-100, Tween20等；
5.當(dāng)游離ε-氨基(賴氨酸殘基的氨基)存在于抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)時(shí),或位于酶的催化位點(diǎn)時(shí),生物素化會(huì)降低或損傷抗體蛋白的結(jié)合力或活性；
6.生物素還可能與不同的功能基團(tuán),如羰基、氨基、巰基、異咪唑基及苯酚基,也可與糖基共價(jià)結(jié)合；
7.交聯(lián)反應(yīng)后,應(yīng)充分透析,否則,殘余的生物素會(huì)對(duì)生物素化抗體與親和素的結(jié)合產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)作用；
8.在細(xì)胞的熒光標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中,中和親和素的本底低,但由于鏈霉親和素含有少量正電荷,故對(duì)某些細(xì)胞可導(dǎo)致高本底。
濃 度 1mg/1ml
規(guī) 格 0.1ml/100μg 0.2ml/200μg
抗體來(lái)源 Rabbit
克隆類(lèi)型 polyclonal
交叉反應(yīng) Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Sheep
產(chǎn)品類(lèi)型 一抗
研究領(lǐng)域 腫瘤 神經(jīng)生物學(xué) 合成與降解 新陳代謝
蛋白分子量 predicted molecular weight: 130kDa
性 狀 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human nNos/NOS-1
亞 型 IgG
純化方法 affinity purified by Protein A
儲(chǔ) 存 液 Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4
產(chǎn)品應(yīng)用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 ICC=1:100-500 IF=1:100-500
mEPC, 小鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞-骨髓
MEF, 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞
NSC，大鼠神經(jīng)干細(xì)胞
RN-h, 大鼠海馬趾神經(jīng)元
rEPC，大鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞-骨髓
RN-c, 大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元
RN-s, 大鼠紋狀體神經(jīng)元
RSC, 大鼠雪旺細(xì)胞
RA, 大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞
RLF, 大鼠成纖維細(xì)胞
rRTEC, 大鼠腎小管上皮細(xì)胞
rCSC, 大鼠心肌細(xì)胞
Anti-NOB1抗體RDFs, 大鼠真皮成纖維細(xì)胞
RLFs, 大鼠肺成纖維細(xì)胞
rCF, 大鼠心臟成纖維細(xì)胞
抗體的鑒定：
1）抗體的效價(jià)鑒定：不管是用于診斷還是用于制備抗體的目的都是要求較高效價(jià)。不同的抗原制備的抗體,要求的效價(jià)不一。鑒定效價(jià)的方法很多,包括有試管凝集反應(yīng),瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn),酶聯(lián)吸附試驗(yàn)等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價(jià)的方法,以資比較。如制備抗抗體的效價(jià),一般就采用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)來(lái)鑒定。
2）抗體的特異性鑒定：抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的識(shí)別能力?？贵w的特異性高,它的識(shí)別能力就強(qiáng)。衡量特異性通常以交叉反應(yīng)率來(lái)表示。交叉反應(yīng)率可用競(jìng)爭(zhēng)抑制試驗(yàn)測(cè)定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競(jìng)爭(zhēng)抑制曲線,計(jì)算各自的結(jié)合率,求出各自在IC50時(shí)的濃度,并按公式計(jì)算交叉反應(yīng)率。
如果所用抗原濃度IC50濃度為pg/管,而一些近似抗原物質(zhì)的IC50濃度幾乎是無(wú)窮大時(shí),表示這一抗血清與其他抗原物質(zhì)的交叉反應(yīng)率近似為0,即該血清的特異性較好。
3）抗體親和力：是指抗體和抗原結(jié)合的牢固程度。親和力的高低是由抗原分子的大小,抗體分子的結(jié)合位點(diǎn)與抗原決定簇之間立體構(gòu)型的合適度決定的。有助于維持抗原抗體復(fù)合物穩(wěn)定的分子間力有氫鍵,疏水鍵,側(cè)鏈相反電荷基因的庫(kù)侖力,范德華力和空間斥力。親和力常以親和常數(shù)K表示,K的單位是L/mol。抗體親和力的測(cè)定對(duì)抗體的篩選,確定抗體的用途,驗(yàn)證抗體的均一性等均有重要意義。
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