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WB結(jié)果中雜帶較多可能的原因及建議

WB結(jié)果中雜帶較多可能的原因及建議:
①目的蛋白存在多個(gè)修飾位點(diǎn)(磷酸化位點(diǎn)、糖基化位點(diǎn)等等),本身可以出現(xiàn)多條帶。查文獻(xiàn)或生物信息學(xué)分析,獲得蛋白序列的修飾位點(diǎn)信息,去除修蛋白飾后確定蛋白實(shí)際大小,這個(gè)需要一定的生物化學(xué)基礎(chǔ)和生信分析能力。
②目的蛋白有其它剪切本,查閱文獻(xiàn)或生物信息學(xué)分析其可能性。
③樣本處理過(guò)程中目的蛋白發(fā)生降解,加入蛋白酶抑制劑;樣本處理在冰上操作。
④上樣量過(guò)高,過(guò)于敏感,適當(dāng)減少上樣量。
⑤一抗特異性不高,重新選擇或制備高特異性的抗體。
⑥一抗不純,純化抗體。
⑦一抗或者二抗?jié)舛绕撸m當(dāng)降低抗體濃度。