產(chǎn)品及特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設計的專一性引物,與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量PCR檢測,避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:流感病毒H3N2亞型PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品貨號:FS-P63214
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點:本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運輸及保存
低溫運輸,-20℃保存,保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX(根據(jù)機型決定,具體見使用方法)。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。
主要服務:DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術:引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
一、稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品,必須設置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設置qPCR反應(20 μL體系,在樣品制備室進行)
10. 如果只做1次重復,則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復,則反應設置數(shù)量相應增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加)
鏈脲佐素(STZ) Streptozocin 18883-66-4 質(zhì)量規(guī)格:>99%,用于藥理造模
結(jié)晶紫細胞群落染色試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:250次
冰凍切片組織βAMYLOID蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:10/20次
石英96孔板 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:1塊
氨基甲酰舍曲林葡萄糖苷酸 Sertraline Carbamoyl Glucuronide 119733-44-7 質(zhì)量規(guī)格:美國進口
醋酸西曲瑞克 Cetrorelix Acetate 120287-85-6 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
酵母鈣ATP酶(Ca++ -ATPase)活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
細胞總脂肪酶(lipase)活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
丹參酮IIA-磺酸鈉(標準品) Tanshinone IIA-sulfonic sodium 69659-80-9 質(zhì)量規(guī)格:UV≥98%,HPLC≥95%
6-氨基青霉烷酸 6-Aminopenicillanic acid 551-16-6 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
香草醛 Vanillin 121-33-5 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
全組織熒光顯微鏡完全間接檢測試劑盒(含一抗和熒光二抗) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:10次
1-萘乙酰精胺三鹽酸 1-Naphthylacetyl Spermine Trihydrochloride 1049731-36-3 質(zhì)量規(guī)格:美國進口
谷胱甘肽(氧化型)(Glutathione;GSSH) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:1克
血液鈣(Ca)定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:50次
大黃酚-8-O-葡萄糖苷(標準品) Chrysophanol-8-O-β-D-glucopyranoside 13241-28-6 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
流感病毒H3N2亞型PCR檢測試劑盒EC肉湯 1000(g)
遠藤氏瓊脂基礎 (CM0479) Oxoid
DMEM(高糖),干粉 含4500mg/l葡萄糖,L-谷氨酰胺
110mg/l酸鈉,不含碳酸氫鈉12800-017
BactoTM Agar
PALCAM Listeria selective agar( base) acc.to van Netten et al.PALCAM 1.11755.0500MERCK默克
KLIGLER agar Double sugar iron agar acc.toKLIGLER KLIGLER 1.03913.0500MERCK默克
Littman瓊脂基礎 250(g)
T1N0肉湯 250(g)
高氏一號合成培養(yǎng)基 250(g)
CIN-I培養(yǎng)基基礎 250(g)
- 溫馨提示:為規(guī)避購買風險,建議您在購買前務必確認供應商資質(zhì)與產(chǎn)品質(zhì)量。
- 免責申明:以上內(nèi)容為注冊會員自行發(fā)布,若信息的真實性、合法性存在爭議,平臺將會監(jiān)督協(xié)助處理,歡迎舉報