乙型肝炎病毒ccc DNA(HBV-cccDNA)PCR檢測試劑盒

產(chǎn)品及特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設(shè)計的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：乙型肝炎病毒ccc DNA(HBV-cccDNA)PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品貨號：FS-P64044
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據(jù)機型決定，具體見使用方法）。

實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法：
一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品，必須設(shè)置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進行）
10. 如果只做1次重復(fù)，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）

硬脂酸(Standard for GC,>99%(GC)) Stearic acid 21128 質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,>99%(GC)

胸腺肽alpha 1 Thymosin alpha 1 Acetate 62304-98-7 質(zhì)量規(guī)格：BR,進分

膽維?。藴势罚?/span> VITAMIN D4 511-28-4 質(zhì)量規(guī)格：含量測定

全組織熒光顯微鏡直接檢測試劑盒(含熒光一抗) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10次

比枯枯靈,右旋荷包牡丹堿 (+)-Bicuculline 485-49-4 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，BR

水中大腸群（coliform）基因熒光定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

M. avium RFLP基因分析試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

組織CHK2激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C） 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

冰凍切片核酸氧化8-氧鳥苷（8-oxo-G）熒光染色測定試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10次

2-氟-1,3-二甲基氯化咪唑翁六氟磷酸酯(DFIH)  2-Fluoro-1,3-dimethylimidazolidinium hexafluorophosphate 164298-27-5 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Bz-rA亞磷酰胺單體 Bz-rA Phosphoramidite 104992-55-4 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

BrdU標記法細胞繁殖熒光定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/50 次

RUNX3蛋白共沉淀分析試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：5次

十溴二苯醚 Pentabromophenyl ether 1163-19-5 質(zhì)量規(guī)格：>98%

布比卡因(標準品) Bupivacaine base 2180-92-9 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品

鹽酸布比卡因 Bupivacaine HCl 14252-80-3 質(zhì)量規(guī)格：>95%,USP

乙型肝炎病毒ccc DNA(HBV-cccDNA)PCR檢測試劑盒LAP3  亮氨酸氨基肽酶3抗體 規(guī)格: 0.2mlNDUFA9  NDUFA9蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Bone sialoprotein  骨涎蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlDGAT1/Diglyceride acyltransferase  二脂酰甘油?；D(zhuǎn)移酶抗體 規(guī)格: 0.2ml

Na+/K+-ATPase Alpha1  Na+/K+-ATPase α1 鈉鉀ATP酶α1多肽抗體 規(guī)格: 0.2mlFBXW12/FBXO35  FBXW12蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

GNAO1/G0 Protein alpha   G蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合蛋白O亞基A2抗體 規(guī)格: 0.2ml14-3-3 family protein  蘋果14-3-3蛋白抗體(植物) 1ml

SLY  2型豬鏈球溶素抗體 規(guī)格: 1mlC17orf78  17號染色體開放閱讀框78抗體 規(guī)格: 0.2ml

Fibulin 1  “衰老關(guān)鍵蛋白”抗體 規(guī)格: 0.2mlROCK1  Rho相關(guān)蛋白激酶1抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-IGF1R(Tyr980)  磷酸化胰島素樣生因子1受體抗體 規(guī)格: 0.1mlTET2  甲基雙加氧酶TET2抗體 規(guī)格: 0.2ml

Ephrin B3  酪氨酸蛋白激酶B3抗體 規(guī)格: 0.2mlAPM2  脂肪特定轉(zhuǎn)錄因子2抗體 規(guī)格: 0.2ml

ENPP1  核苷酸內(nèi)焦磷酸酶/磷酸二酯酶1抗體 規(guī)格: 0.2mlNFKBIA/IKB alpha  核因子κB抑制蛋白α抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-Dnmt1(Tyr399)  磷酸化DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1抗體 規(guī)格: 0.1mlcaspase-8 subunit p18  半胱氨酸蛋白酶8抗體 規(guī)格: 0.2ml

C11ORF67/PTD015  11號染色體開放閱讀框67抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-PTPN6(Tyr476)  磷酸化蛋白酪氨酸磷酸酶1C抗體 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-LIMK1(Thr508)/LIMK2(Thr505)  磷酸化單絲氨酸蛋白激酶1/2抗體 規(guī)格: 0.1ml

TMUB1  跨膜和泛素樣結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

OTUB  泛素特異性蛋白酶Otubain2抗體 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-PDPK1(Ser393)  磷酸化3磷酸肌醇依賴性蛋白激酶1抗體 規(guī)格: 0.1ml

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