實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
產(chǎn)品及特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設(shè)計的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：肺炎支原體(MP)PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品貨號：FS-P64054
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據(jù)機型決定，具體見使用方法）。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法：
一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品，必須設(shè)置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進行）
10. 如果只做1次重復(fù)，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）
(S)-4-羥基鹽酸心得安 (S)-4-Hydroxy Propranolol Hydrochloride 135201-50-2 質(zhì)量規(guī)格：美國進口
L-纈氨酸 L-Valine 72-18-4 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
細胞短鏈脂酰輔酶A合成酶（ACYL COA SYNTHETASE）活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
單硝酸異山梨酯 Isosorbide 5-mononitrate 16051-77-7 質(zhì)量規(guī)格：含量測定
活體組織氧化應(yīng)激活性氧（ROS）初級綠色熒光測定試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：40/100次
麥角甾醇(90%) Ergosterol 57-87-4 質(zhì)量規(guī)格：>90%,BR
微型RNA（miRNA）文庫構(gòu)建技術(shù)試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：5次
細胞線粒體復(fù)合物I蛋白表達比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/50 次
體液基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP-9）活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
中粘度羥丙基纖維素 Hydroxypropyl cellulose 9004-64-2 質(zhì)量規(guī)格：4000~6500 mpa.s,BR
1-氨基芘(>98.0%(HPLC)(T)) 1-Aminopyrene 1606-67-3 質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(T)
聚蔗糖70 Ficol 70 26873-85-8 質(zhì)量規(guī)格：BR
體外非細胞系統(tǒng)細胞色素P450亞酶4A1（LAURIC ACID）活性高效液相色譜法（HPLC）定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
飲料谷氨酰胺比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
糖血清蛋白（GSP）酶連續(xù)反應(yīng)比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
豆甾醇 Stigmasterol 83-48-7 質(zhì)量規(guī)格：>90 %,GC
肺炎支原體(MP)PCR檢測試劑盒Goat Anti-Mouse IgG/Cy5 Cy5標記的羊抗小鼠IgG 規(guī)格: 0.1mlTNFAIP2 瘤壞死因子誘導(dǎo)蛋白2(TNFα-IP 2)抗體 規(guī)格: 0.2ml
JWA JWA蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-Monkey IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的兔抗猴IgG 規(guī)格: 0.1ml
Intra Acrosomal Protein/SP10 子頂端體蛋白10抗體 規(guī)格: 0.2mlCDKN2C/p18 INK4c 細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑2C抗體 規(guī)格: 0.2ml
Galanin 神經(jīng)節(jié)肽抗體 規(guī)格: 0.2mlMYOM1 肌間蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-MAP4K4(Ser631) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶MAP4K4抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-DDX58 (Thr170) 磷酸化DDX58抗體 規(guī)格: 0.1ml
ZNF288/ZBTB20 鋅指蛋白288抗體 規(guī)格: 0.2mlRUNX1/AML1 急性髓細胞白病1蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
CLIC4 細胞內(nèi)氯離子通道蛋白4抗體 規(guī)格: 0.2mlGM130 高爾基體自身蛋白GM130抗體 規(guī)格: 0.2ml
GATA-3 GATA結(jié)合蛋白3抗體 規(guī)格: 0.1mlICAM5/Telencephalin 細胞間粘附分子5抗體 規(guī)格: 0.1ml
TSARG7 子形成相關(guān)凋亡蛋白7抗體 規(guī)格: 0.2mlCNTNAP4 接觸蛋白相關(guān)蛋白4抗體 規(guī)格: 0.2ml
C1QL2/C1QTNF10 補體C1q和瘤壞死因???相關(guān)蛋白10 規(guī)格: 0.2mlPELO PELO蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
ANGPTL3/ANG5 管**素樣蛋白3 規(guī)格: 0.2mlInsulin 胰島素蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
Nucleoporin p62 核孔糖蛋白P62抗體 規(guī)格: 0.2mlPAPPA 娠相關(guān)漿蛋白A抗體 規(guī)格: 0.1ml
KIF5A/NKHC1 驅(qū)動蛋白KIF5A抗體 規(guī)格: 0.2ml
SSTR3 生抑素受體3抗體 規(guī)格: 0.1ml
Mouse Anti-human IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標記的小鼠抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml
phospho-ATF2 (Ser490/498) 磷酸化活化復(fù)制因子2抗體 規(guī)格: 0.1ml
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