登革熱病毒通用型(DFV-U)PCR檢測試劑盒

本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：登革熱病毒通用型(DFV-U)PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品貨號：FS-P64064
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據(jù)機(jī)型決定，具體見使用方法）。

產(chǎn)品及特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

使用方法：
一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個(gè)樣品，必須設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽性對照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）
10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對照，6個(gè)用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

鹽酸托莫西汀(標(biāo)準(zhǔn)品) Atomoxetine HCl 82248-59-7 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品

脫氫乙酸(>98%，BR) Dehydroacetic acid 520-45-6 質(zhì)量規(guī)格：>98%，BR

石蠟切片脂質(zhì)過氧化物異構(gòu)前列腺素（ISOPROSTANE）熒光染色試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：10次

鹽酸小檗胺（標(biāo)準(zhǔn)品） Berbamine hydrochloride 6078-17-7 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

細(xì)胞衰老特異性β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：100/250次

葡萄糖一6一磷酸脫氫酶（G6PD）定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：50次

冰凍切片組織BAX蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次

肌苷-5'-三磷酸三鈉鹽 ITP?Na3 35908-31-7 質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

地生蘭（terrestrial）播種培養(yǎng)基  進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：500毫升溶液/片劑

精子活力和頂體反應(yīng)三色（triple staining）染色試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：50次

細(xì)胞增殖示蹤熒光探針(CFDA SE) CFDA SE;Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester 150347-59-4 質(zhì)量規(guī)格：≥90%，用于熒光標(biāo)記

 細(xì)胞αSMA蛋白表達(dá)熒光定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/50 次

S-乙?；虼饣憠A(>99%,醫(yī)藥級) S-Acetylthiocholine iodide 1866-15-5 質(zhì)量規(guī)格：>99%,醫(yī)藥級

BOC-D-纈氨酸 Boc-D-Val-OH 22838-58-0 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

動(dòng)物組織N-乙酰轉(zhuǎn)移酶2（NAT2）活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

4'-丁基苯乙酮(>97.0%(GC)) 4'-Butylacetophenone 37920-25-5 質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)

登革熱病毒通用型(DFV-U)PCR檢測試劑盒DKK1  抑蛋白DKK1抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-MAP4K4(Ser801)  磷酸化絲裂原活化蛋白激酶MAP4K4抗體 規(guī)格: 0.1ml

EBNA 3B  EB病毒核抗原-3B抗體 0.2mlOSGIN1  氧化應(yīng)激誘導(dǎo)生抑制因子1抗體 規(guī)格: 0.2ml

NFAT5  活化T細(xì)胞核因子5蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlGLCNE  GLCNE蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-ATG16A(Ser213)  磷酸化自噬相關(guān)蛋白16A抗體 規(guī)格: 0.1mlDNAPK/PRKDC  DNA依賴蛋白激酶催化亞基抗體 規(guī)格: 0.2ml

Shh  Shh信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路膜蛋白受體抗體 規(guī)格: 0.1mlBTBD3  BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2ml

Mouse Anti-Goat IgG/APC  APC標(biāo)記的小鼠抗羊IgG 規(guī)格: 0.1mlRabbit Anti-human IgM/PE-CY5  PE-CY5標(biāo)記的兔抗人IgM 規(guī)格: 0.1ml

CD109  轉(zhuǎn)化生因子β1結(jié)合蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlC4orf44  4號染色體開放閱讀框44抗體 規(guī)格: 0.2ml

PSMD7  蛋白酶調(diào)解因子7抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-Smad1(Ser206)  磷酸化細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子Smad-1抗體 規(guī)格: 0.1ml

SCHAD/HADHSC  短鏈L-3羥烷基輔酶A脫酶抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-CstF64(Ser498)  磷酸化細(xì)胞分裂相關(guān)蛋白CSTF64抗體 規(guī)格: 0.1ml

NSP1/SH2D3A  SH2結(jié)構(gòu)域蛋白3A抗體 規(guī)格: 0.2mlC9orf86  9號染色體開放閱讀框86抗體 規(guī)格: 0.2ml

Mouse anti-rabbit IgG ascites  小鼠抗兔IgG腹水 規(guī)格: 1mlHCV-NS3  丙型肝炎病毒-NS3抗體 規(guī)格: 0.1ml

ITIH4  α胰蛋白酶重鏈H4抗體 規(guī)格: 0.2mlCOPS2/TRIP15  甲狀受體相互作用蛋白15抗體 規(guī)格: 0.2ml

SH2B1  SH2B蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlCARD7/NALP1  凋亡加強(qiáng)結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rabbit Anti-Monkey IgG/PE-Cy7  PE-Cy7標(biāo)記的兔抗猴IgG 規(guī)格: 0.1mlEXPB-2  植物延展素-β 規(guī)格: 1ml

TRADD  瘤壞死因子受體1相關(guān)死亡域蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

LST1  細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

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