羊源性成分(Ovine)定性PCR檢測試劑盒

產(chǎn)品及特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設計的專一性引物，與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量PCR檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：羊源性成分(Ovine)定性PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品貨號：FS-P64262
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據(jù)機型決定，具體見使用方法）。

實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術：引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法：
一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品，必須設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設置qPCR反應（20 μL體系，在樣品制備室進行）
10. 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復，則反應設置數(shù)量相應增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）

細胞HHV6（HUMAN HERPESVIRUS 6）病毒定量PCR擴增檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

 石蠟切片組織GSK-3ALPHA蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次

香豆素 102(>97.0%(HPLC)(N)) Coumarin 102 41267-76-9 質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(HPLC)(N)

 細胞TNF BETA蛋白表達熒光定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/50 次

 細胞脘蛋白（PRION）蛋白表達流式細胞儀檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次

鹽酸阿地芬寧 Adiphenine HCl 50-42-0 質(zhì)量規(guī)格：含量> 99%

N-去甲基地爾硫卓鹽酸鹽 N-Desmethyl Diltiazem Hydrochloride 130606-60-9 質(zhì)量規(guī)格：美國進口

pre-ELM-11(>98.0%(T)) pre-ELM-11 854623-98-6 質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

硫酸核糖霉素 Ribostamycin Sulfate 53797-35-6 質(zhì)量規(guī)格：≥630μg/mg,BR,可用于細胞培養(yǎng)

 載玻片細胞P21蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次

 細胞TNF ALPHA蛋白表達熒光定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/50 次

磺酰熒光素(>75.0%(HPLC)(T)) Sulfonfluorescein 921940 質(zhì)量規(guī)格：>75.0%(HPLC)(T)

細胞CASEIN KINASE 1δ激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C） 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

利福霉素SV（標準品） Rifamycin Sodium 14897-39-3 質(zhì)量規(guī)格：效價測定

噴托維林 Carbetapentane 77-23-6 質(zhì)量規(guī)格：美國進口

促腎上腺皮質(zhì)（1-10），人 ACTH (1-10), human 325553 質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

羊源性成分(Ovine)定性PCR檢測試劑盒PCDHGC4  原鈣粘蛋白γC4抗體 規(guī)格: 0.2ml

CD138/Syndecan 1  多配體蛋白聚糖1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Rabbit Anti-human IgM/APC  APC標記的兔抗人IgM 規(guī)格: 0.1ml

FAM76A  FAM76A蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-TPH(Ser260)  磷酸化色氨酸羥化酶抗體 規(guī)格: 0.1ml

GLUR4  谷氨酸受體4抗體 規(guī)格: 0.1ml

REC8  減數(shù)分裂重組蛋白家族REC8抗體 規(guī)格: 0.2ml

EGR2  早期生反應蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1ml

RNF86  環(huán)指蛋白86 規(guī)格: 0.2ml

ERAS/HRAS2  胚胎干細胞RAS蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-NFKBIA(Ser32/36)  磷酸化IKB alpha(Ser32/36)抗體 規(guī)格: 0.1ml

CDC34/UBC3  細胞周期調(diào)控因子34 規(guī)格: 0.1ml

Mouse Anti-rabbit IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標記的小鼠抗兔IgG 規(guī)格: 0.1ml

Protein S/PROS  蛋白S抗體 規(guī)格: 0.2ml

CCDC160  卷曲螺旋結(jié)構域蛋白160抗體 規(guī)格: 0.2ml

TPX2  微管相關同源蛋白TPX2抗體 規(guī)格: 0.2ml

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