冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí), 以防止冰晶過(guò)大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品名稱(chēng)
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matrix基質(zhì)膠(相關(guān)2)
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規(guī)格
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5ml
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貨號(hào)
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BH-X019928
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細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類(lèi)型的細(xì)胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類(lèi);
1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取.
保存條件 Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.
required for DNA binding.
Phosphorylated at basal level in the absence of DNA damage. Hyper-phosphorylated in an ATM-dependent manner in response to DNA damage induced by ionizing radiation. Hyper-phosphorylated in an ATR-dependent manner in response to DNA damage induced by UV irradiation.
DISEASE : Note=A chromosomal aberration involving TP53BP1 is found in a form of myeloproliferative disorder chronic with eosinophilia. Translocation t(5;15)(q33;q22) with PDGFRB creating a TP53BP1-PDGFRB fusion protein.
Similarity : Contains 2 BRCT domains.
Database links : UniProtKB/Swiss-Prot: Q12888.2
p53結(jié)合蛋白1(53BP1)是細(xì)胞周期檢查點(diǎn)激酶蛋白,是新近發(fā)現(xiàn)的DNA損傷修復(fù)通路中兩個(gè)非常重要的蛋白激酶MDC1和53BP1蛋白之一,目前多用于腫瘤方面的研究。
英文名稱(chēng) Anti-phospho-AMPK beta 1 (Ser182)
中文名稱(chēng) 磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1抗體
別 名 PRKAB1(phospho S182); PRKAB1(phospho-S182); AMPK beta 1(Ser182); p-AMPK beta 1(Ser182); p-AMPK beta 1(S182); 5 AMP activated protein kinase subunit beta 1; AMPK; AMPK beta 1 chain; AMPKb; HAMPKb; PRKAB1; 5'-AMP-activated protein kinase subunit beta-1; AMP-activated protein kinase beta subunit; protein kinase, AMP-activated, noncatalytic, beta-1; AMPK beta -1 chain; 5'-AMP-activated protein kinase beta-1 subunit; AMPKb; AMPK subunit beta-1; AAKB1_HUMAN.
濃 度 1mg/1ml
規(guī) 格 0.1ml/100μg
抗體來(lái)源 Rabbit
matrix基質(zhì)膠(相關(guān)2)鈣激活中性蛋白酶1檢測(cè)試劑盒單組份酸性樣品溶劑 水分≤0.01%二甲基三硫 98%
琥珀酸脫氫酶1-1檢測(cè)試劑盒庫(kù)侖法無(wú)隔膜卡爾費(fèi)休試劑 用作電解液魚(yú)腥草 98%
抑絲蛋白1檢測(cè)試劑盒庫(kù)侖法通用型陽(yáng)用卡爾費(fèi)休試劑 用作有隔膜式陽(yáng)電解液2.5-二羥基-1.4-二噻烷 97%
C4BPA檢測(cè)試劑盒庫(kù)侖法含吡啶陰用卡爾費(fèi)休試劑 完全按G8 7600-87配制2,3-二乙基-5-甲基吡 98%
超氧化物歧化酶2檢測(cè)試劑盒庫(kù)侖法酮測(cè)定陽(yáng)用卡爾費(fèi)休試 也可用作無(wú)隔膜電解液四氫噻吩-3-酮 98%
硫氧還蛋白檢測(cè)試劑盒庫(kù)侖法**型陽(yáng)用卡爾費(fèi)休試劑 不含甲、氯四氫噻吩-3-酮 ≥98%, Kosher, FG
凝血因子XIII檢測(cè)試劑盒庫(kù)侖法**型陰用卡爾費(fèi)休試劑 不含甲、氯和四氯化碳反式-2,4-癸二烯 >90.0%(GC)
細(xì)胞處理方法:
以下細(xì)胞處理方法及細(xì)胞說(shuō)明書(shū)僅供參考,具體操作還需要根據(jù)到貨時(shí)細(xì)胞密度,細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)等具體情況,酌情處理,如需要更詳細(xì)技術(shù)指導(dǎo)。
一.貼壁細(xì)胞
客戶(hù)接收到細(xì)胞,用75%的酒精(建議配制75%酒精的水是過(guò)的)培養(yǎng)瓶外部。
肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X ,200X 各一張)。
顯微鏡觀察細(xì)胞,當(dāng)細(xì)胞融匯至80%左右(可以傳代的情況下),細(xì)胞應(yīng)該在37度培養(yǎng)箱預(yù)溫1-2h后再做處理。如未達(dá)到細(xì)胞傳代密度,培養(yǎng)瓶應(yīng)預(yù)留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
嚴(yán)格無(wú)菌操作,打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無(wú)菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細(xì)胞,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2 培養(yǎng)。
二.懸浮細(xì)胞
1. 接收到細(xì)胞,用75%的酒精(建議配制75%酒精的水是過(guò)的)培養(yǎng)瓶外部。
2. 肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收???時(shí)的細(xì)胞100X ,200X 各一張)。
3. 嚴(yán)格無(wú)菌操作,打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4. 將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出(嚴(yán)禁直接傾倒)。
5. 1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。 換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和新鮮培養(yǎng)基,37℃,5%CO2培養(yǎng)。