培養(yǎng)方法
傳代方法 將舊培養(yǎng)液吸除,PBS清洗兩遍后,加入6mL(/100mm皿)胰酶,在顯微鏡下觀察,期間禁止搖晃培養(yǎng)皿,細胞剛有脫落時,則吸除大部分胰酶,留約0.5mL,移至培養(yǎng)箱消化,約2min取出。傳代用12mL CM1-1培養(yǎng)液終止消化,輕輕吹打均勻細胞,后可分3~6皿培養(yǎng);
生長條件 37℃,5%CO2,CM1-1培養(yǎng)液。CM1-1培養(yǎng)液:90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H:DMEM高糖培養(yǎng)液,含谷氨酰胺,含丙酮酸鈉。
存儲條件 凍存則用6mL凍存液(90%FBS+10%DMSO)終止消化,吹打均勻,分為6支凍存管,用程序降溫盒于-80℃凍存,過夜轉移至液氮中保存。
產品名稱
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規(guī)格
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貨號
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H9人類胚胎干細胞培養(yǎng)體系
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500ml
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BH-X019930
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培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距???紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及細胞化學檢測。
細胞培養(yǎng)方法:
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
Subunit : AMPK is a heterotrimer of an alpha catalytic subunit (PRKAA1 or PRKAA2), a beta (PRKAB1 or PRKAB2) and a gamma non-catalytic subunits (PRKAG1, PRKAG2 or PRKAG3). Interacts with FNIP1 and FNIP2.
Tissue Specificity : Highly expressed in kidney, heart, white adipose tissue, lung and spleen.
Post-translational modifications : Phosphorylated when associated with the catalytic subunit (PRKAA1 or PRKAA2). Phosphorylated by ULK1; leading to negatively regulate AMPK activity and suggesting the existence of a regulatory feedback loop between ULK1 and AMPK.
Similarity : Belongs to the 5'-AMP-activated protein kinase beta subunit family.
Database links :
Entrez Gene: 5564 Human
Entrez Gene: 19079 Mouse
Entrez Gene: 83803 Rat
Omim: 602740 Human
SwissProt: Q9Y478 Human
SwissProt: Q9R078 Mouse
SwissProt: P80386 Rat
Unigene: 6061 Human
Unigene: 726001 Human
Unigene: 458152 Mouse
Unigene: 3619 Rat
AMPKβ1(AMP-activated Protein Kinase beta-1)(腺苷單磷酸活化蛋白激酶β-1)是一種參與細胞適應能量危機的應激反應酶,AMPK不僅可以在細胞水平作為能量的感受器,還可以通過和細胞因子,如瘦素、脂聯素和ghrelin來參與調節(jié)機體的能量消耗和能量攝入.
英文名稱 Anti-phosphos-PCNA (Tyr211)
H9人類胚胎干細胞培養(yǎng)體系抗凝血因子3檢測試劑盒三異 95%3-(2-呋喃基)烯 99%
趨化因子C-C-基元配體2檢測試劑盒(±)-樟腦(合成) 96%甲基糠基二硫 98%
趨化因子C-C-基元配體4檢測試劑盒AR,99.5%反,反-2,4-庚二烯 90%
腎酶檢測試劑盒CP,99.5%三硫酮 ≥99%, FG
抗原215檢測試劑盒GR,99.8%4-羥基-3-甲氧基苯甲 98%
亮氨酸氨肽酶3檢測試劑盒PT,99.8%六氯酮 99%
可溶性CD44分子檢測試劑盒光譜級2-異基-4-甲基噻唑 98%
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為玻璃**,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。