原代肥大細胞培養(yǎng)體系

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

1.研究的對象是活細胞

在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。

3.研究的樣本可以達到比較均一性

通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。

4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標記等各種儀器設(shè)備。

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

細胞處理方法：

以下細胞處理方法及細胞說明書僅供參考，具體操作還需要根據(jù)到貨時細胞密度，細胞生長狀態(tài)等具體情況，酌情處理，如需要更詳細技術(shù)指導(dǎo)。

一．貼壁細胞

客戶接收到細胞，用75%的酒精（建議配制75%酒精的水是過的）培養(yǎng)瓶外部。

肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張）。

顯微鏡觀察細胞，當(dāng)細胞融匯至80%左右（可以傳代的情況下），細胞應(yīng)該在37度培養(yǎng)箱預(yù)溫1-2h后再做處理。如未達到細胞傳代密度，培養(yǎng)瓶應(yīng)預(yù)留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。

將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。

用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細胞,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。1000rpm,5min離心，重懸細胞。換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃,5%CO2  培養(yǎng)。

二．懸浮細胞

1. 接收到細胞，用75%的酒精（建議配制75%酒精的水是過的）培養(yǎng)瓶外部。

2. 肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張）。

3. 嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。

4. 將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴禁直接傾倒）。

5. 1000rpm,5min離心，重懸細胞。 換新的細胞培養(yǎng)瓶和新鮮培養(yǎng)基，37℃,5%CO2培養(yǎng)。

冷凍保存細胞之方法

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

Database links : NCBI Reference Sequence: NP_002559.2

UniProtKB/Swiss-Prot: P11940.2

英文名稱  Anti-EMC1

中文名稱  腺樣癌特異性相關(guān)抗原EMC1抗體

別    名  EMC1_HUMAN; ER membrane protein complex subunit 1; ER membrane protein complex subunit 1 precursor; 2700016F22Rik; C230096C10Rik; Emc1; Hypothetical protein LOC23065; K0090_HUMAN; KIAA0090; mKIAA0090; OTTHUMP; PSEC0263; RIKEN cDNA C230096C10 gene; RP1-43E13.1; RP23-371E13.1; Uncharacterized protein KIAA0090.

濃    度  1mg/1ml

規(guī) 格  0.1ml/100μg  0.2ml/200μg  1ml/1mg

抗體來源  Rabbit  

克隆類型  polyclonal

交叉反應(yīng)  Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Cow, Rabbit

產(chǎn)品類型  一抗    

研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 學(xué)  

蛋白分子量  predicted molecular weight: 107kDa

性    狀  Lyophilized or Liquid

免 疫 原  KLH conjugated synthetic peptide derived from human PPO

亞    型  IgG

純化方法  affinity purified by Protein A

儲 存 液  0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide
原代肥大細胞培養(yǎng)體系SIGMAR1檢測試劑盒4-基-2-乙酰氨基-2-脫氧-β-D-吡喃葡萄糖苷 98%甲基烯酸叔丁酯, 包含有200 ppm MEHQ阻聚劑, 99%

敏感性脂肪酶檢測試劑盒4-基-2-乙酰氨基-2-脫氧-α-D-吡喃半乳糖苷 98%甲基烯酸環(huán)己酯, 包含60 - 100 ppm MEHQ（氫醌單甲）穩(wěn)定劑,

脂肪甘油三酯脂酶檢測試劑盒鄰基-β-D-吡喃葡萄糖苷 99%二甲基烯酸二乙二酯 96%

血管**素樣蛋白4檢測試劑盒2-基-β-D-吡喃半乳糖苷 99%，non-animal origin甲基烯酸二乙基氨基乙酯, 包含100 ppm 吩噻, 99%

甲酰肽受體1檢測試劑盒對-α-D-葡萄糖吡喃苷 99%烯酸乙氧基乙氧基乙酯, >90%(GC),含1000ppmMEHQ穩(wěn)定劑

??白信號調(diào)節(jié)因子7檢測試劑盒1-O-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷2,3,4,6-四乙酸鹽 98%二烯酸二乙二酯 75%

II型膠原纖維α基因檢測試劑盒三-O-乙酰基-D-葡萄烯糖 98%烯酸二甲基氨基乙酯 99%