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第2年
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  • PCR反應(yīng)內(nèi)參基因的三大作用 PCR反應(yīng)內(nèi)參基因的三大作用：1.樣品提取質(zhì)量的判斷標(biāo)準(zhǔn)在PCR實(shí)驗(yàn)中，內(nèi)參基因首先作為判斷樣品提取是否成功的標(biāo)準(zhǔn)。當(dāng)使用逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時，如果結(jié)果為陰性，不能直接得出樣品中沒有目的基因的結(jié)論。只有當(dāng)內(nèi)參基因的CT值處于一個合理的范圍內(nèi)，例如20左右，我們才能確信樣品制備沒有問題，從而確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。2.目的基因表達(dá)量的計(jì)算基礎(chǔ)在進(jìn)行相對定量PCR時，內(nèi)參基因是計(jì)算目的基
    發(fā)布時間：2024-10-29 11:04 點(diǎn)擊次數(shù)：5 次
  • 普通pcr引物設(shè)計(jì)和熒光定量pcr引物設(shè)計(jì)差異 普通pcr引物設(shè)計(jì)和熒光定量pcr引物設(shè)計(jì)的區(qū)別一、方法不同1、普通pcr引物設(shè)計(jì)：引物的優(yōu)劣直接關(guān)系到PCR的特異性與成功與否。2、熒光定量pcr引物設(shè)計(jì)：通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性探針，標(biāo)記跟蹤PCR產(chǎn)物進(jìn)行實(shí)時監(jiān)測反應(yīng)，利用與之相適應(yīng)的軟件對產(chǎn)物進(jìn)行分析，計(jì)算待測樣品模板的初始濃度二、原理不同1、普通pcr引物設(shè)計(jì)：為了找到一對合適的核苷酸片段，使其能有效地?cái)U(kuò)增模板DNA序列。2、熒光定
    發(fā)布時間：2024-10-25 13:53 點(diǎn)擊次數(shù)：7 次
  • ELISA實(shí)驗(yàn)操控的儀器操作技能 為了使終究的ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)效果就要較高的可靠性，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)開端前有必要好的前期準(zhǔn)備作業(yè)包括對實(shí)驗(yàn)所需的儀器進(jìn)行質(zhì)控。使儀器堅(jiān)持作業(yè)狀況，應(yīng)建立維護(hù)和校對儀器的標(biāo)準(zhǔn)操作程序，常見需求操控的儀器包括：移液器（加樣槍）、溫箱、洗板機(jī)和酶標(biāo)儀。具體質(zhì)控操作技能整理的如下要求： 1、洗板機(jī)：每個設(shè)置洗板后的殘留液有各自的規(guī)矩，一般不逾越2μl；人工扣板時，墊紙不濕；守時檢查管孔是否阻塞。2、酶標(biāo)儀：常常
    發(fā)布時間：2024-10-21 10:58 點(diǎn)擊次數(shù)：13 次
  • ELISA實(shí)驗(yàn)各項(xiàng)條件的選擇 在ELISA中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，其中包括:1、固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。2、包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相
    發(fā)布時間：2024-10-14 16:43 點(diǎn)擊次數(shù)：24 次
  • 抗體驗(yàn)證的八種方法介紹 抗體驗(yàn)證的八種方法：1.省略一抗這是測試由二級試劑引起的潛在背景的有用且重要的控制。然而，這個實(shí)驗(yàn)沒有提供關(guān)于一抗質(zhì)量的信息。2.抗體信號與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)一致WB中觀察到的分子量、組織分布和染色模式與文獻(xiàn)一致。這種驗(yàn)證方法很容易執(zhí)行，但也有一些限制；例如，WB中條帶的正確分子量并不一定會告訴您該條帶是所需的目標(biāo)蛋白質(zhì)。在WB中很容易有數(shù)百種蛋白
    發(fā)布時間：2024-10-09 13:55 點(diǎn)擊次數(shù)：37 次
  • ELISA試劑盒檢測未知抗原的雙抗體夾心法過程 這種形式需要使用特定于該抗原不同表位的兩種不同抗體。這兩種抗體通常被稱為匹配抗體對。其中一種抗體包被于多孔板表面上并用作捕獲抗體以促進(jìn)抗原的固定，另一種抗體被酶偶聯(lián)并促進(jìn)抗原的檢測。ELISA試劑盒檢測未知抗原的雙抗體夾心法過程：1、包被：用包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/mL。向每個Elisa板孔中加入0.1mL，4℃過夜孵育。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3
    發(fā)布時間：2024-10-05 13:43 點(diǎn)擊次數(shù)：40 次
  • PCR反應(yīng)擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)多條帶分析 擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)多條帶（1）引物用量偏大，引物的特異性不高。應(yīng)調(diào)換引物或降低引物的使用量。（2）循環(huán)的次數(shù)過多。適當(dāng)增加模板的量，減少循環(huán)次數(shù)。（3）酶的用量偏高或酶的質(zhì)量不好，應(yīng)降低酶量或調(diào)換另一來源的酶。（4）退火溫度偏低，退火及延伸時間偏長。應(yīng)提高退火溫度，減少變性與延伸時間，也可采用二種溫度的PCR擴(kuò)增。（5）樣品處理不當(dāng)。（6）Mg2+濃度偏高，因適當(dāng)調(diào)整Mg2+使用濃度。（7）若為PCR試
    發(fā)布時間：2024-09-27 14:19 點(diǎn)擊次數(shù)：62 次
  • 影響抗原抗體反應(yīng)的兩大因素 抗原與抗體發(fā)生特異性結(jié)合后，雖由親水膠體變?yōu)槭杷z體，若溶液中無電解質(zhì)參加，仍不出現(xiàn)可見反應(yīng)。為了促使沉淀物或凝集物的形成，常用0.85％氯化鈉或各種緩沖液作為抗原及抗體的稀釋液。由于氯化鈉在水溶液中解離成Na+和C1－，可分別中和膠體粒子上的電荷，使膠體粒子的電勢下降。當(dāng)電勢降至臨界電勢（12～15mV）以下時，則能促使抗原抗體復(fù)合物從溶液中析出，形成可見的沉淀物或凝集物。一、溫度在一定范圍內(nèi)，
    發(fā)布時間：2024-09-18 15:15 點(diǎn)擊次數(shù)：75 次
  • PCR反應(yīng)主要成份Taq DNA聚合酶分析 一般TaqDNA聚合酶活性半衰期為92.5℃130min，95℃40min，97℃5min?，F(xiàn)在人們又發(fā)現(xiàn)許多新的耐熱的DNA聚合酶，這些酶的活性在高溫下活性可維持更長時間。TaqDNA聚合酶的酶活性單位定義為74℃下，30min，摻入10nmol/LdNTP到核酸中所需的酶量。TaqDNA聚合酶的一個致命弱點(diǎn)是它的出錯率，一般PCR中出錯率為2×10-4核苷酸/每輪循環(huán)，在利用PCR克隆和進(jìn)行序
    發(fā)布時間：2024-08-29 16:53 點(diǎn)擊次數(shù)：91 次
  • RT-LAMP檢測試劑盒試驗(yàn)使用方法 RT-LAMP檢測試劑盒試驗(yàn)使用方法:一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。1.標(biāo)記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。2.用帶芯槍頭分別加入45μL熒光PCR模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。3.在7號管中加入5μL陽性對照（濃度為1×10E8拷貝/
    發(fā)布時間：2024-08-15 15:34 點(diǎn)擊次數(shù)：112 次
  • 防血清揮發(fā)的方法 防發(fā)揮的方法 1、使用前：必須滅活處理，56℃30分鐘。對于一些品質(zhì)高的胎牛血清和新牛血清可以考慮不經(jīng)滅活直接用于細(xì)胞培養(yǎng)。 2、儲存條件：一般儲存于－20℃，同時應(yīng)避免反復(fù)凍融。購買大包裝的血清后，首先要滅活處理，然后分裝成小包裝，儲存于－20℃，使用前融化。融化時現(xiàn)置于4℃。融化后的血清在4℃不宜長時間存放，應(yīng)盡快使用。 3、使用濃度：自從有了合成培養(yǎng)基，血清就是作為一種添加成分與合成培
    發(fā)布時間：2024-08-08 10:21 點(diǎn)擊次數(shù)：130 次
  • 小鼠8異前列腺素ELISA試劑盒操作步驟 操作步驟:1. 標(biāo)準(zhǔn)品的加樣：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；。2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑100μl，空白孔除外。4.
    發(fā)布時間：2024-07-24 09:58 點(diǎn)擊次數(shù)：111 次
  • 細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建病毒法步驟 細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建病毒法步驟：1、確定目標(biāo)細(xì)胞系的相關(guān)信息，細(xì)胞的培養(yǎng)條件，細(xì)胞的增值速度，支原體污染情況；2、預(yù)實(shí)驗(yàn)確定MOI值，可通過查閱文獻(xiàn)確定慢病毒在目標(biāo)細(xì)胞系中的MOI值也可參考查閱得到的數(shù)據(jù)，設(shè)計(jì)梯度實(shí)驗(yàn)，摸索合適MOI；3、預(yù)實(shí)驗(yàn)確定篩選**用量，常用的**篩選有：puro、G418、潮霉素等；4、細(xì)胞鋪板，將需要的細(xì)胞量接種于合適的培養(yǎng)皿中；5、細(xì)胞感染，通過接種的細(xì)胞量及預(yù)實(shí)驗(yàn)得來的
    發(fā)布時間：2024-07-16 16:27 點(diǎn)擊次數(shù)：112 次
  • ELISA試劑盒鑒定方法詳述 鑒別方法：Ⅰ：利用干擾實(shí)驗(yàn)即可辨別elisa試劑盒是否檢測目的抗原，方法如下：1、將針對試劑盒特異性的重組蛋白抗原和試劑盒中的檢測抗體配置成antibody:antigen≈1:2的混合孵育液。2、37℃孵育15分鐘后，代替原試劑盒中的檢測抗體3、后續(xù)操作按照試劑盒說明書進(jìn)行，加檢測抗體、酶復(fù)合物和底物4、實(shí)驗(yàn)完畢后，檢測其標(biāo)準(zhǔn)曲線，如果標(biāo)準(zhǔn)曲線良好則說明加入的目的抗原和試劑盒抗體不匹配，試劑盒檢
    發(fā)布時間：2024-07-10 14:29 點(diǎn)擊次數(shù)：133 次
  • ELISA實(shí)驗(yàn)顯色淡結(jié)果分析 ELISA（酶聯(lián)**吸附試驗(yàn)）是一種用于檢測抗原或抗體濃度的**學(xué)試驗(yàn)。如果ELISA實(shí)驗(yàn)的顯色淡或靈敏度低，可能有多種原因。ELISA實(shí)驗(yàn)顯色淡的原因及解決方案： 原因一：試劑盒在運(yùn)輸途中時間太長，溫度太高。 解決方案：盡量縮短運(yùn)輸時間，夏季應(yīng)放冰塊降溫。 原因二：試劑盒未充分平衡。 解決方案：試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫（約25℃
    發(fā)布時間：2024-06-24 16:00 點(diǎn)擊次數(shù)：107 次
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