- 入駐時(shí)間: 2021-06-18
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細(xì)胞接收后的處理:
1)收到細(xì)胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2)請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上,可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中,若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代。
英文簡(jiǎn)稱
規(guī)格
貨號(hào)
SK-BR-3-LUC-PURO
1×106
P-X951
產(chǎn)品詳情:
細(xì)胞別稱;SK-BR-3-LUC-PURO;人乳腺癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記
種屬來源;人
組織來源;
生長(zhǎng)特性;貼壁生長(zhǎng)
細(xì)胞形態(tài);上皮細(xì)胞樣
背景簡(jiǎn)介;Luciferase SK-BR-3-細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)螢火蟲熒光素酶。該細(xì)胞株性狀穩(wěn)定,培養(yǎng)時(shí)不需要添加維持??捎米魑灮鹣x熒光素酶活性檢測(cè)中的陽性對(duì)照,也可用于活體動(dòng)物成像實(shí)驗(yàn)。SK-BR-3細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。SK-BR-3 [SKBR3]細(xì)胞是由Trempe·G和Old·L·J于1970年從一位43歲的白人女性乳腺癌患者的胸腔積液中分離得到的。SK-BR-3 [SKBR3]細(xì)胞亞顯微結(jié)構(gòu)特征包括微絲和橋粒、肝糖原顆粒、大溶酶體、成束的細(xì)胞質(zhì)纖絲;SK-BR-3 [SKBR3]細(xì)胞過表達(dá)HER2/c-erb-2基因產(chǎn)物。
生物等級(jí);1
細(xì)胞規(guī)格;1x106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測(cè);無
保藏機(jī)構(gòu);ATCC; HTB-30 DSMZ; ACC-736
培養(yǎng)基;90%5A+10%FBS+PS+1. 0ug/ml puro
培養(yǎng)條件;氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃
凍存條件;無血清凍存液,液氮儲(chǔ)存
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2)培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二.細(xì)胞處理:
1)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇::將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:1、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3)細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例:
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理:
公司正在出售的產(chǎn)品:
艾滋病病毒p55/p17抗體 |
動(dòng)物甲狀腺組織細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒 |
HIV1 p55 + p17 |
人單純皰疹病毒Ⅰ型(HSVⅠ)抗體(IgG)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè) |
溶血磷脂酸?;D(zhuǎn)移酶β抗體 |
a-(a-AMYLASE)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 |
Agpat2 |
大鼠多巴胺D1受體(D1R)elisa檢測(cè)試劑盒 |
細(xì)胞JNK2激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C) |
小鼠內(nèi)脂素(VF)elisa檢測(cè)試劑盒 |
人肝臟甘油三脂脂肪酶(HTGL)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
吞噬細(xì)胞運(yùn)動(dòng)蛋白1抗體 ELMO1 |
大鼠胱抑素SN(CST1)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
維甲酸受體G抗體 RXR gamma |
植物(擬南芥)超氧化物歧化酶[銅鋅]2,葉綠體(CSD2)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
SAR1蛋白抗體 SAR1A |
葡萄球菌菌體蛋白抗體 Staphyloccocus aureus Rosenbach tropina |
SMCR7L蛋白抗體 MIEF1 |
異染色質(zhì)蛋白1結(jié)合蛋白3抗體 HP1BP3 |
Ⅰ型補(bǔ)體受體(C3b/C4b受體)抗體 CD35 |
原癌基因R-Ras抗體 RRAS |
AF680標(biāo)記的核因子κB抑制蛋白E抗體 IKBKE, Alexa Flour 680 conjugated |
泛素蛋白連接酶抗體 Fbx32 |
減數(shù)分裂內(nèi)切酶EME2抗體 EME2 |
肺癌癌基因蛋白3抗體 HLC3/Kanadaptin |
G蛋白偶聯(lián)受體GPR142蛋白抗體 GPR142 |
G蛋白α亞單位蛋白Q抗體 GNAQ |
SK-BR-3+LUC人乳腺癌細(xì)胞腦特異性多肽蛋白19抗體 PCP4 |
普蘭林肽<降血糖藥>抗體 Pramlintide |
石蠟切片組織化學(xué)AP酶聯(lián)NBT/BCIP完全間接檢測(cè)試劑盒 |
犬5羥色胺(5-HT)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
小鼠單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)elisa檢測(cè)試劑盒 |
實(shí)驗(yàn)步驟:
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上,利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝,獲得含目的基因的慢病毒;
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板,轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右;
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞,并置于37 ℃,5% CO2培養(yǎng)箱中孵育;
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基,并繼續(xù)培養(yǎng);
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng),直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%,獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。