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細(xì)胞接收后的處理：
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
人胚腎細(xì)胞+Egfp;HEK293-eGFP-puro
英文簡(jiǎn)稱
規(guī)格
貨號(hào)
HEK293-EGFP-PURO
1×106
P-X11287
產(chǎn)品詳情：
細(xì)胞別稱；HEK293-EGFP-PURO；人腎上皮細(xì)胞系-EGFP；人胚腎細(xì)胞株-綠色熒光蛋白標(biāo)記
種屬來(lái)源；人
組織來(lái)源；胚胎腎
生長(zhǎng)特性；貼壁生長(zhǎng)
細(xì)胞代數(shù)；p3-p8
特別注意；該細(xì)胞貼壁不牢，運(yùn)輸過(guò)程中細(xì)胞會(huì)有脫落，如細(xì)胞脫落，請(qǐng)離心收集，消化后重新鋪瓶
背景簡(jiǎn)介；Luciferase HEK-293細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)螢光蛋白。該細(xì)胞株性狀穩(wěn)定，培養(yǎng)時(shí)不需要添加維持?？捎米魑灩獾鞍谆钚詸z測(cè)中的陽(yáng)性對(duì)照，也可用于活體動(dòng)物成像實(shí)驗(yàn)。該細(xì)胞通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶GFP基因。 HEK-293細(xì)胞是剪切過(guò)的人腺病毒5(Ad5)轉(zhuǎn)染的人胚腎細(xì)胞形成的永生化細(xì)胞，HEK-293細(xì)胞包含并表達(dá)轉(zhuǎn)染的Ad5基因。早期報(bào)道中指出，293 HEK-293細(xì)胞基因組中含有腺病毒5(Ad5)基因組的左側(cè)端和右側(cè)端的DNA，但是現(xiàn)在明確了只存在其左側(cè)端的DNA。經(jīng)過(guò)對(duì)Ad5的插入點(diǎn)的克隆測(cè)序發(fā)現(xiàn)，Ad5的1-4344位線性核苷酸整合入293 [HEK-293]細(xì)胞19號(hào)染色體(19q13.2)。293 [HEK-293]細(xì)胞為人類腺病毒載體擴(kuò)的宿主，可表達(dá)異常的玻連蛋白的細(xì)胞表面受體，由整合素β1亞單位和玻連蛋白受體α-v亞單位組成。
生物等級(jí)；2
細(xì)胞規(guī)格；1x106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測(cè)；無(wú)
保藏機(jī)構(gòu)；ATCC; CRL-1573 ATCC： PTA-4488 DSMZ： ACC-305 ECACC： 85120602
培養(yǎng)基；90% DMEM+10% FBS+PS+1. 0ug/ml puro
培養(yǎng)條件；氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件；無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過(guò)夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理：
公司正在出售的產(chǎn)品：
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骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)elisa生化檢測(cè)試劑盒 |
DNA Ladder 5000 60T |
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OT/BGP ELISA Kit |
大量全血基因組DNA純化試劑盒（20毫升全血） |
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人蛋白激酶C beta II(PKC-bII)elisa生化檢測(cè)試劑盒 |
大鼠內(nèi)脂素(visfatin)elisa檢測(cè)試劑盒 |
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PKC-bIIELISAKit |
土壤幾丁質(zhì)酶測(cè)試盒 |
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大鼠β位淀粉樣前體蛋白裂解酶2(BACE2)elisa檢測(cè)試劑盒 |
LAMBDA噬菌體DNA氯化銫純化試劑盒 |
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小鼠抗心肌抗體(AMA)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
水通道蛋白-2抗體 AQP2 |
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乳酸脫氫酶工酶LDH-1測(cè)試盒 R1：40ml×1 抑制法 |
絲氨酸水解酶樣蛋白2抗體 SERHL |
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植物胱硫醚-β-合成酶（Cystathionine-β-synthase；CBS）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 |
PELI3蛋白抗體 PELI3 |
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活化轉(zhuǎn)錄因子6β抗體 ATF6 beta |
PE標(biāo)記人FOXP3單克隆抗體 human FOXP3/PE |
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新的飽食分子蛋白抗體 Nucleobindin 2 |
組織相容性抗原DQA1重組兔單克隆抗體 HLA-DQA1 |
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嗅覺(jué)受體5H2抗體 OR5H2 |
1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框113抗體 C1orf113 |
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大腦邊緣系統(tǒng)相關(guān)膜蛋白抗體 LSAMP |
環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC1抗體 CRTC1 |
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蛋白激酶錨定蛋白樣蛋白2抗體 NBEAL2 |
FAM96B蛋白抗體 FAM96B |
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EXOSC8蛋白抗體 EXOSC8 |
人胚腎細(xì)胞+Egfp;HEK293-eGFP-puro磷酸化細(xì)胞周期檢測(cè)點(diǎn)激酶1抗體 phospho-CHEK1 (Ser286) |
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磷脂轉(zhuǎn)移蛋白抗體 PLTP |
大鼠干擾素誘導(dǎo)蛋白10(IP-10/CXCL10)elisa檢測(cè)試劑盒 |
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小鼠腫瘤壞死因子受體超家族成員11A(TNFRSF11A/RANK)elisa檢測(cè)試劑盒 |
組織樣品組織G（CATHEPSIN G）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 |
實(shí)驗(yàn)步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開(kāi)始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。
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