產(chǎn)品詳情
  • 產(chǎn)品名稱:人胚腎細(xì)胞+Egfp;HEK293-eGFP-puro

  • 產(chǎn)品型號(hào):P-X11287
  • 產(chǎn)品**:派瑞曼
  • 產(chǎn)品價(jià)格:0
  • 折扣價(jià)格:0
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簡(jiǎn)單介紹:
人胚腎細(xì)胞+Egfp;HEK293-eGFP-puro公司正在出售的產(chǎn)品:SNU-C1結(jié)腸癌細(xì)胞 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)核信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白2抗體 CBS ELISA Kit 胱硫醚定量elisa kit 卵巢癌抗原抗體 SCC-15細(xì)胞
詳情介紹:

細(xì)胞接收后的處理:


1)收到細(xì)胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2)請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上,可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中,若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。

4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代。

人胚腎細(xì)胞+Egfp;HEK293-eGFP-puro


英文簡(jiǎn)稱

規(guī)格

貨號(hào)

HEK293-EGFP-PURO

1×106

P-X11287

產(chǎn)品詳情:


細(xì)胞別稱;HEK293-EGFP-PURO;人腎上皮細(xì)胞系-EGFP;人胚腎細(xì)胞株-綠色熒光蛋白標(biāo)記

種屬來(lái)源;人

組織來(lái)源;胚胎腎

生長(zhǎng)特性;貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞代數(shù);p3-p8

特別注意;該細(xì)胞貼壁不牢,運(yùn)輸過(guò)程中細(xì)胞會(huì)有脫落,如細(xì)胞脫落,請(qǐng)離心收集,消化后重新鋪瓶

背景簡(jiǎn)介;Luciferase HEK-293細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)螢光蛋白。該細(xì)胞株性狀穩(wěn)定,培養(yǎng)時(shí)不需要添加維持??捎米魑灩獾鞍谆钚詸z測(cè)中的陽(yáng)性對(duì)照,也可用于活體動(dòng)物成像實(shí)驗(yàn)。該細(xì)胞通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶GFP基因。         HEK-293細(xì)胞是剪切過(guò)的人腺病毒5(Ad5)轉(zhuǎn)染的人胚腎細(xì)胞形成的永生化細(xì)胞,HEK-293細(xì)胞包含并表達(dá)轉(zhuǎn)染的Ad5基因。早期報(bào)道中指出,293 HEK-293細(xì)胞基因組中含有腺病毒5(Ad5)基因組的左側(cè)端和右側(cè)端的DNA,但是現(xiàn)在明確了只存在其左側(cè)端的DNA。經(jīng)過(guò)對(duì)Ad5的插入點(diǎn)的克隆測(cè)序發(fā)現(xiàn),Ad51-4344位線性核苷酸整合入293 [HEK-293]細(xì)胞19號(hào)染色體(19q13.2)。293 [HEK-293]細(xì)胞為人類腺病毒載體擴(kuò)的宿主,可表達(dá)異常的玻連蛋白的細(xì)胞表面受體,由整合素β1亞單位和玻連蛋白受體α-v亞單位組成。

生物等級(jí);2

細(xì)胞規(guī)格;1x106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝

支原體檢測(cè);無(wú)

保藏機(jī)構(gòu);ATCC; CRL-1573 ATCC PTA-4488 DSMZ ACC-305 ECACC 85120602

培養(yǎng)基;90% DMEM+10% FBS+PS+1. 0ug/ml puro

培養(yǎng)條件;氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃

凍存條件;無(wú)血清凍存液,液氮儲(chǔ)存

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

(1)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。


一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2)培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二.細(xì)胞處理:

1)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇::將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過(guò)夜

。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:
1、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。 
3、輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3)細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例:
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過(guò)夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

實(shí)驗(yàn)原理:


公司正在出售的產(chǎn)品:

骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)elisa生化檢測(cè)試劑盒

DNA Ladder 5000 60T

OT/BGP ELISA Kit

大量全血基因組DNA純化試劑盒(20毫升全血)

人蛋白激酶C beta II(PKC-bII)elisa生化檢測(cè)試劑盒

大鼠內(nèi)脂素(visfatin)elisa檢測(cè)試劑盒

PKC-bIIELISAKit

土壤幾丁質(zhì)酶測(cè)試盒

大鼠β位淀粉樣前體蛋白裂解酶2(BACE2)elisa檢測(cè)試劑盒

LAMBDA噬菌體DNA氯化銫純化試劑盒

小鼠抗心肌抗體(AMA)elisa分析檢測(cè)試劑盒

水通道蛋白-2抗體 AQP2

乳酸脫氫酶工酶LDH-1測(cè)試盒 R140ml×1 抑制法

絲氨酸水解酶樣蛋白2抗體 SERHL

植物胱硫醚-β-合成酶(Cystathionine-β-synthaseCBS)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒

PELI3蛋白抗體 PELI3

活化轉(zhuǎn)錄因子6β抗體 ATF6 beta

PE標(biāo)記人FOXP3單克隆抗體 human FOXP3/PE

新的飽食分子蛋白抗體 Nucleobindin 2

組織相容性抗原DQA1重組兔單克隆抗體 HLA-DQA1

嗅覺(jué)受體5H2抗體 OR5H2

1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框113抗體 C1orf113

大腦邊緣系統(tǒng)相關(guān)膜蛋白抗體 LSAMP

環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC1抗體 CRTC1

蛋白激酶錨定蛋白樣蛋白2抗體 NBEAL2

FAM96B蛋白抗體 FAM96B

EXOSC8蛋白抗體 EXOSC8

人胚腎細(xì)胞+Egfp;HEK293-eGFP-puro磷酸化細(xì)胞周期檢測(cè)點(diǎn)激酶1抗體 phospho-CHEK1 (Ser286)

磷脂轉(zhuǎn)移蛋白抗體 PLTP

大鼠干擾素誘導(dǎo)蛋白10(IP-10/CXCL10)elisa檢測(cè)試劑盒

小鼠腫瘤壞死因子受體超家族成員11A(TNFRSF11A/RANK)elisa檢測(cè)試劑盒

組織樣品組織GCATHEPSIN G)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒

實(shí)驗(yàn)步驟:


1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上,利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝,獲得含目的基因的慢病毒;
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板,轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右;
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞,并置于37 ℃,5% CO2培養(yǎng)箱中孵育;
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基,并繼續(xù)培養(yǎng);
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開(kāi)始加藥篩選培養(yǎng),直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%,獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。


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