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產(chǎn)品名稱：人APP基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株;7WD10
產(chǎn)品型號：P-X11228
產(chǎn)品**：派瑞曼
產(chǎn)品價(jià)格：0
折扣價(jià)格：0
產(chǎn)品文檔：

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簡單介紹：

人APP基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株;7WD10公司正在出售的產(chǎn)品：sv-huc-1膀胱上皮永生化細(xì)胞脂蛋白脂酶抗體 Muscle(CKM)ELISA Kit 斑馬魚肌肌酸激酶定量elisa kit 有絲分裂相關(guān)蛋白INSC抗體 RL95-2 內(nèi)膜癌細(xì)胞

詳情介紹：

細(xì)胞接收后的處理：

1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。

4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。

人APP基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株;7WD10

英文簡稱

規(guī)格

貨號

7WD10

1×106

P-X11228

產(chǎn)品詳情：

細(xì)胞別稱；7WD10；人APP基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株

種屬來源；人

組織來源；脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞

生長特性；貼壁生長

細(xì)胞形態(tài)；梭形細(xì)胞樣

細(xì)胞代數(shù)；10代以內(nèi)

背景簡介；采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞野生型AβPPTS1 基因，所得細(xì)胞表達(dá)野生型AβPPTS1蛋白

細(xì)胞規(guī)格；1x106cells/T25或1mL凍存管

支原體檢測；無

培養(yǎng)基；90%DMEM-H+10%FBS+PS

培養(yǎng)條件；氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件；無血清凍存液，液氮儲存

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：

1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜

。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：
1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

實(shí)驗(yàn)原理：

公司正在出售的產(chǎn)品：

植物茄呢醇磷酸酶2,葉綠體(SPS2/SPPS)elisa生化檢測試劑盒

D2D檢測試劑盒

chloroplastic(SPS2/SPPS)ELISA kit

4 Hydroxynonenal

人促胃液素受體(GsaR)elisa生化檢測試劑盒

4-羥基壬烯醛抗體

HumanGsaRELISAKit

HIRIP3

山羊γ干擾素(IFN-γ)elisa檢測試劑盒免費(fèi)代測

HIRA相互作用蛋白3抗體

組織游離酶連續(xù)循環(huán)熒光定量檢測試劑盒

LYNX1蛋白抗體

小鼠鋅結(jié)合α2-糖蛋白1(αZGP1)elisa檢測試劑盒

LYNX1

大鼠抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)elisa分析檢測試劑盒

11號染色體開放閱讀框65抗體

磷酸化原癌基因Yes相關(guān)蛋白1抗體 Anti-Phospho-YAP1(Tyr407)

C11orf65

抑癌基因SSDP2抗體

轉(zhuǎn)錄因子21抗體 Anti-SOX21

SSBP2

神經(jīng)元突觸膜胞外分泌調(diào)節(jié)蛋白1抗體 Anti-RIM1/ABCA4

CSRNP3蛋白抗體

核因子1B抗體 Anti-NFIB/NF1B2

CSRNP3

磷酸葡萄糖酸內(nèi)酯酶抗體 Anti-PGLS

蛙皮降壓肽抗體 Anti-Sauvagine

人APP基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株;7WD10外周髓鞘蛋白-22抗體 Anti-PMP22

凝血酶(凝血因子II)重鏈抗體 Anti-Thrombin heavy chain

Bovine IgG / RBITC

羅丹明標(biāo)記牛IgG

層粘連蛋白受體1單克隆抗體

實(shí)驗(yàn)步驟：

1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。

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