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細(xì)胞接收后的處理:
4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代。
英文簡稱
規(guī)格
貨號
HTB-80
1×106
P-X11222
產(chǎn)品詳情:
細(xì)胞別稱;HTB-80;人胰腺癌細(xì)胞
種屬來源;人
組織來源;胰腺癌
生長特性;貼壁生長
細(xì)胞形態(tài);多角形
細(xì)胞代數(shù);10代以內(nèi)
背景簡介;HTB-80細(xì)胞產(chǎn)生高水平的MUC-1 mRNA, 較低水平的MUC-2 mRNA ,不表達(dá)MUC-3 基因。
細(xì)胞規(guī)格;1x106cells/T25或1mL凍存管
支原體檢測;無
培養(yǎng)基;90%McCOY's 5A+10%FBS
培養(yǎng)條件;氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃
凍存條件;無血清凍存液,液氮儲存
1)收到細(xì)胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。
2)請?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上,可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中,若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2)培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二.細(xì)胞處理:
1)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇::將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:1、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3)細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例:
1、細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理:
公司正在出售的產(chǎn)品:
植物花生四烯酸(AA)elisa生化檢測試劑盒 |
動物糖蛋白氨基苯硼酸(APA)樹脂法純化試劑盒 |
AA ELISA kit |
精制胎牛血清 |
人促甲狀腺素受體(TSHR)抗體elisa生化檢測試劑盒 |
大鼠抗精子抗體(AsAb)elisa檢測試劑盒 |
HumanTSHRantibodyELISAKit |
果糖-1,6-二磷酸(FDP)測試盒 |
磁珠法瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒 96T |
內(nèi)濁度法定量檢測試劑盒 |
100,161,012,410,112 |
生長抑素受體3抗體 SSTR3 |
豚鼠白介素1(IL-1)elisa分析檢測試劑盒 |
雙特異性磷酸酶抗體14抗體 DUSP14 |
藥品糖精(saccharin)含量高效液相色譜法定量檢測試劑盒 |
p53誘導(dǎo)核蛋白1抗體 p53 DINP1 |
琥珀酸脫氫酶復(fù)合體亞基A抗體 SDHA |
PE-Cy7標(biāo)記人CD24單克隆抗體 human CD24/PE-Cy7 |
鋅指蛋白675抗體 ZNF675 |
自噬相關(guān)蛋白1抗體 ATG1/ULK1 |
鋅指蛋白ZGPAT抗體 ZGPAT |
組織蛋白酶D重鏈抗體 Cathepsin D |
腸型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體 intestinal FABP |
核纖層蛋白B(細(xì)胞核膜標(biāo)志物)抗體 Lamin B1 |
促性腺素釋放受體2抗體 GNRHR2 |
ERVFRD-1抗體 ERVFRD-1 |
E3泛素蛋白連接酶抗體DTX1抗體 Deltex |
人胰腺癌細(xì)胞;HTB-80磷酸化帕金蛋白抗體 phospho-PARK2 (Ser378) |
磷酸化粘附相關(guān)激酶抗體 phospho-AXL (Tyr698+Tyr702+Tyr703) |
大鼠低密度脂蛋白(LDL)elisa檢測試劑盒 |
小鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2(ACE2)elisa檢測試劑盒 |
細(xì)胞半胱-5(CASPASE-5)活性比色法定量檢測試劑盒 |
實(shí)驗(yàn)步驟:
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上,利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝,獲得含目的基因的慢病毒;
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板,轉(zhuǎn)染時細(xì)胞密度控制在80%左右;
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞,并置于37 ℃,5% CO2培養(yǎng)箱中孵育;
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基,并繼續(xù)培養(yǎng);
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng),直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%,獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。