實(shí)驗(yàn)試劑
牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂等
實(shí)驗(yàn)設(shè)備
試管、三角瓶、燒杯、量筒、玻璃棒天平、牛角匙、高壓蒸汽**鍋等
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的制備
1) 計(jì)算 根據(jù)配方計(jì)算出實(shí)驗(yàn)中各種藥品所需要的量,然后再分別稱量。
2) 稱量 準(zhǔn)確稱取各種成分。一些不易稱量的成分如牛肉膏,可用玻璃棒取出放硫酸紙上稱量,然后連同硫酸紙一起放入燒杯中。
3) 溶解 向燒杯內(nèi)加入所需的水量,將牛肉膏用水洗下后,取出硫酸紙棄去。加熱攪拌全溶后稍放冷。
4) 調(diào)pH值 用酸度計(jì)或精密pH試紙測(cè)定其pH值,并用10%NaOH調(diào)至所需pH值,必要時(shí)用濾紙或脫脂棉過(guò)濾。一般比要求的pH高出0.2,因?yàn)楦邏赫羝?*后,pH常降低。
5) 分裝 根據(jù)不同需要,可將配好的培養(yǎng)基分裝入配有棉塞的試管或三角瓶?jī)?nèi)(附圖1-1)。注意分裝時(shí)避免培養(yǎng)基掛在瓶口或管口上引起雜菌污染。如液體培養(yǎng)基,應(yīng)裝試管高度的1/4左右;固體培養(yǎng)基裝試管高度的1/5左右;裝入三角瓶的量以三角瓶容量的一半為限。
6) 包扎 試管扎成捆。試管和三角瓶的棉塞外用硫酸紙和牛皮紙包扎,紙上表明培養(yǎng)基的名稱、配制日期等。
7) ** 培養(yǎng)基用0.1Mpa(15lb/in2)高壓蒸汽**15~20min,
2. 培養(yǎng)基的高壓蒸汽**
**原理:水的沸點(diǎn)可隨壓力的增加而提高,當(dāng)高壓蒸汽**鍋中水煮沸時(shí),因鍋是密閉的,蒸汽不能溢出,而使壓力增加,水的沸點(diǎn)和溫度也隨之增加。因此,高壓蒸汽**是利用高壓蒸汽產(chǎn)生的高溫,以及熱蒸汽的穿透能力來(lái)達(dá)到**的目的。一般在0.1Mpa(15lb/in2)的壓力時(shí),溫度可達(dá)121℃只要維持15~20min,就可殺死一切微生物的營(yíng)養(yǎng)體和它們的各種孢子。
**方法:
1) 加水于**器內(nèi)到規(guī)定的水平面。
2) 需**的物品(分裝在試管、三角燒瓶中的固、液體培養(yǎng)基),棉塞、硅膠泡沫塞等用防潮紙包好(防止鍋內(nèi)水汽把棉塞淋濕),放入**鍋內(nèi)的套筒中。擺放要疏松,不可太擠,否則阻礙蒸汽流通,影響**效果。
3) 將**鍋蓋的排氣管插人套筒側(cè)壁的凹槽內(nèi),關(guān)閉**鍋蓋旋緊螺栓,切勿漏氣。
4) 打開(kāi)放氣閥,加熱,熱蒸汽上升,以排除鍋內(nèi)冷空氣,排氣約5~ l0min,關(guān)閉放氣閥。
5) 關(guān)閉放氣閥后,整個(gè)**鍋成為密閉狀態(tài),而蒸汽又不斷增多,這時(shí)壓力和溫度都上升,直至壓力表指針達(dá)到所需壓力時(shí),開(kāi)始計(jì)時(shí),通過(guò)調(diào)節(jié)熱源,維持此壓力到所需時(shí)間。
6) **完畢,待壓力自然降至0時(shí),打開(kāi)放氣閥,注意不能打開(kāi)過(guò)早,否則突然降壓致使培養(yǎng)基沖騰,使棉塞、硅膠泡沫塞沾污,甚至沖出容器以外。
7) 打開(kāi)**鍋蓋,取出已**的器皿及培養(yǎng)基。
8) **鍋用完后,將鍋內(nèi)剩余的水倒掉,以免日久腐蝕。
3. 微生物的分離與純化
借助于劃線將混雜的**材料逐步稀釋,*后在瓊脂平板上分散開(kāi)來(lái),使之出現(xiàn)單一菌落而達(dá)到分離純化的目的。
注意事項(xiàng)(牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的制備、微生物的分離與純化)
1. 要嚴(yán)格按配方配制。
2. 調(diào)pH不要過(guò)頭。
3. 高壓**要注意物品不要過(guò)多,加熱后排除冷空氣,到時(shí)降壓回零取物。
4. 劃線法分離純化微生物注意各區(qū)勿相互交叉。