實(shí)驗(yàn)材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè)
4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺(tái)；
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產(chǎn)品名稱
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規(guī)格
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貨號(hào)
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A549-RFP細(xì)胞
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詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
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FS-X5421
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產(chǎn)品名稱：肺癌細(xì)胞
公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說(shuō)明書(shū)、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。
凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。
銀杏內(nèi)酯A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： DL-HistidineHEATR4蛋白抗體包裝5g
銀杏內(nèi)酯B(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： DL-Histidine·HCl透明質(zhì)酸及粘蛋白1抗體包裝1g
銀杏內(nèi)酯C(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： DL-Homophenylalanine轉(zhuǎn)錄因子HES7抗體包裝5g
銀杏內(nèi)酯J(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： DL-Homoserine宮頸黏液蛋白相關(guān)蛋白抗體包裝1g
銀杏內(nèi)酯K（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Crizotinib HCl,PF-02341066 HCl流感病H3N8血凝素抗體包裝25g
澤瀉C-23-醋酸酯;澤瀉C單乙酸酯英文名稱： DL-Lysine·HCl流感病H3N7血凝素抗體包裝5g
澤瀉F(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： DL-Norvaline流感病H3N1血凝素抗體包裝100mg
粘委陵菜（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： DL-Norvaline同源盒蛋白HoxB3抗體包裝50mg
戰(zhàn)骨（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： DL-Pyroglutamic acid遺傳性血色病蛋白相關(guān)蛋白1抗體包裝1g
獐牙菜苷（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： DL-tert-Leucine甘油吸收/轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白GUP1抗體包裝250mg
獐牙菜苦苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： N-Acetyl-DL-methionineHHIP蛋白抗體包裝25g
樟腦（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： DL-Homocysteine 亞鐵氧化酶抗體包裝5g
掌葉防已堿；巴馬汀，黃藤素；(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： m-Fluoro-DL-tyrosine 鳥(niǎo)苷酸釋放因子p532蛋白抗體包裝1g
柘木（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Calpain Inhibitor I(ALLN) HERC2 E3泛素蛋白連接酶抗體包裝5g
浙貝母（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： DL-Ala-DL-AlaHERC3 E3泛素蛋白連接酶抗體包裝1g
A549-RFP細(xì)胞鞘氨醇菌屬Human DEFA1(Defensin Alpha 1, Neutrophil) ELISA KitAlias: DEFA1|DEF1|HNP-1|HP1|MRS|alpha2|DEFA1B|DEFA2|defensin|alpha1|myeloid-relatedsequence|defensin|alpha1|HP-1|myeloid-relatedsequence|neutrophildefensin1|alpha-Defensin1ELISAKitReactivity: Human
腐皮鐮孢Human CCR7(C-C chemokine receptor type 7) ELISA KitAlias: CCR7|CD197|BLR2|C-Cchemokinereceptortype7|C-CCKR-7|CC-CKR-7|CCR-7|CD197|CD197antigen|CDw197|CCchemokinereceptor7|chemokine(C-Cmotif)receptor7|CMKBR7|chemokine(C-C)receptor7|EBI1|EBV-inducedGprotein-coupledreceptor1|EBV-inducedG-proteincoupledreceptor1|Epstein-Barrvirusinducedgene1|Epstein-BarrvirusinducedG-proteincoupledreceptor|Epstein-Barrvirus-inducedG-proteincoupledreceptor1|EVI1|lymphocyte-specificGprotein-coupledpeptidereceptor|MIP-3betareceptorELISAKitReactivity: Human
平菇Human CSNK2B(Casein kinase II subunit beta) ELISA KitAlias: CSNK2B|CaseinkinaseIIsubunitbeta|CKIIbeta|Phosvitin|ProteinG5a|CK2N|G5A|CK2B|CSK2B|caseinkinase2|betapolypeptide|CKIIbeta|ProteinG5aELISAKitReactivity: Human
黃色金黃桿菌Human MSTN(Growth/differentiation factor 8) ELISA KitAlias: MSTN(Myostatin)|GDF-8|GDF8|growthdifferentiationfactor8|growth|differentiationfactor8ELISAKitReactivity: Human
長(zhǎng)根小奧德蘑Human SFRP4(Secreted frizzled-related protein 4) ELISA KitAlias: SFRP4(Secretedfrizzled-relatedprotein4)|DDC-4|sFRP-4|FRP-4|FRP-AP|frpHE|FrzB2|Frizzledprotein|Humanendometrium|secretedfrizzled-relatedprotein4|secretedfrizzled-relatedprotein4ELISAKitReactivity: Human
亞膜畢赤酵母Human SLC25A20(Mitochondrial carnitine/acylcarnitine carrier protein) ELISA KitAlias: SLC25A20(Mitochondrialcarnitine|acylcarnitinecarrierprotein)|CAC|CACT|Carnitine|acylcarnitinetranslocase|Solutecarrierfamily25member20ELISAKitReactivity: Human
繩狀籃狀菌Human ETFβ(Electron transfer flavoprotein subunit beta) ELISA KitAlias: ETFβ(Electrontransferflavoproteinsubunitbeta)|FP585|Beta-ETFELISAKitReactivity: Human
生根根瘤菌Human NEBL(Nebulette) ELISA KitAlias: NEBL(Nebulette)|LNEBL|Actin-bindingZ-diskproteinELISAKitReactivity: Human
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
- 溫馨提示：為規(guī)避購(gòu)買風(fēng)險(xiǎn)，建議您在購(gòu)買前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)與產(chǎn)品質(zhì)量。
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