實(shí)驗(yàn)材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml燒杯2個(gè);
3、50ml離心筒2個(gè)
4、培養(yǎng)皿1個(gè),細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個(gè);無菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺(tái);
產(chǎn)品名稱
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規(guī)格
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貨號(hào)
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RAMOSRA1細(xì)胞
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詳見說明書
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FS-X5490
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公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng),質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好,我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù),同時(shí)提供新價(jià)格、說明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說明。
凍存培養(yǎng)基:
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。
1)細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基,其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu),可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。
2)凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基,含10% DMSO,適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案,必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲(chǔ)存,直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí),利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí),應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低1°C。或者,將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
光甘草定(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Micafungin sodium肝果糖激酶抗體包裝5g
廣東紫株(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Icariside F2脊柱側(cè)后凸畸形肽酶抗體包裝100mg
廣防已(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Dovitinib組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶PCAF抗體包裝50mg
廣藿香(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Acetytastragaloside磷酸化原癌基因c-kit抗體包裝100g
廣藿香酮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 5-Phenyl-2,4-pentadienoic acid磷酸化原癌基因c-kit抗體包裝25g
廣草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Buserelin Acetate離子通道蛋白Kv3.1抗體包裝1g
廣山楂(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Secalciferol激肽釋放酶11抗體包裝5g
廣山楂葉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 25-Hydroxyvitamin D2k輕鏈抗體包裝5g
廣天仙子(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Liraglutide絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶KIST抗體(激酶相互作用與白血病相關(guān)基因)包裝5g
廣棗(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: MK-4827 (Niraparib)驅(qū)動(dòng)蛋白KIF5A抗體包裝25g
龜(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: (2S)-2-Hydroxyglutaric Acid 神經(jīng)離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體包裝5g
鬼臼素(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 3-Deazaneplanocin A HCl salt原癌基因K-ras抗體包裝1g
桂皮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 3-Keto Fenretinide 腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因抗體包裝25g
桂枝(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 4-Epi Minocycline血藍(lán)蛋白抗體包裝5g
哈巴俄苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Taurodeoxycholic acid sodium salt心臟離子通道蛋白亞基2抗體包裝1g
RAMOSRA1細(xì)胞廣島鏈霉菌Human SAC3D1 (SAC3 domain-containing protein 1) ELISA KITAlias: SAC3D1ELISAKitReactivity: Human
Human RTBDN (Retbindin) ELISA KITAlias: RTBDNELISAKitReactivity: Human
天目山類芽孢桿菌Human RHEBL1 (GTPase RhebL1) ELISA KITAlias: RHEBL1ELISAKitReactivity: Human
Human RHOT1 (Mitochondrial Rho GTPase 1) ELISA KITAlias: RHOT1ELISAKitReactivity: Human
邊緣假單胞菌Human AHR(Aryl hydrocarbon receptor) ELISA KitAlias: AHR(Arylhydrocarbonreceptor)|BHLHE76|Ahreceptor|AH-receptor|aromatichydrocarbonreceptor|ClassEbasichelix-loop-helixprotein76ELISAKitReactivity: Human
聚生**殼菌Human RD3 (Protein RD3) ELISA KITAlias: RD3ELISAKitReactivity: Human
漢遜德巴利酵母 Human RASAL1 (RasGAP-activating-like protein 1) ELISA KITAlias: RASAL1ELISAKitReactivity: Human
粉紅單端孢霉Human RRAD (GTP-binding protein RAD) ELISA KITAlias: RRADELISAKitReactivity: Human
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
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