實驗材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml燒杯2個;
3、50ml離心筒2個
4、培養(yǎng)皿1個,細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個
6、細(xì)胞計數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺;
產(chǎn)品名稱
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規(guī)格
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貨號
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SVEC4-10細(xì)胞
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詳見說明書
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FS-X5533
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公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng),質(zhì)量有保證、價格優(yōu)惠、實驗效果好,我司為您提供免費代測服務(wù),同時提供新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。
凍存培養(yǎng)基:
凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。
1)細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基,其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu),可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。
2)凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基,含10% DMSO,適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實驗方案,必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計數(shù)器、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低1°C?;蛘?,將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
麻楓樹酚酮B(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: rU Phosphoramidite肌肉特異性環(huán)指蛋白3抗體包裝5g
(草)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bz-rA Phosphoramidite磷酸化原癌基因c-Met相關(guān)酪氨酸激酶抗體包裝1g
(中)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: i-bu-rG Phosphoramidite絲裂原活化蛋白激酶13抗體包裝25g
根(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Dacomitinib多纖毛素蛋白抗體包裝5g
麻醉椒苦素英文名稱: Ac-rC Phosphoramidite肌管素相關(guān)蛋白8抗體包裝100g
麻醉椒素英文名稱: Tetrodotoxin巨噬甘露糖受體2抗體包裝25g
馬鞭草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tetrodotoxin周期G1的相互作用蛋白抗體包裝5g
馬勃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ac-dC Phosphoramidite主導(dǎo)控制樣蛋白3抗體包裝1g
馬齒莧(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 2,2'-Anhydro-5-Me-U絲裂原活化蛋白激酶MKK3抗體包裝5g
馬兜鈴(北馬兜鈴)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 7-Deaza-7-I-2’-dGMYSM1抗體包裝1g
馬兜鈴酸A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 7-Deaza-7-I-2’-dA單羧酸轉(zhuǎn)運蛋白-1抗體包裝5g
馬兜鈴酸C英文名稱: Dideoxyadenosine微管相關(guān)蛋白1A抗體包裝10g
馬兜鈴酸D英文名稱: Xylitol中期因子/肝素結(jié)合生長因子抗體包裝50g
馬兜鈴酸II英文名稱: Xylitol鹽皮質(zhì)受體抗體包裝25g
馬蘭草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 2',3'-Dideoxythymidine促黑α抗體包裝5g
SVEC4-10細(xì)胞斑玉蕈Human MS4A1(B-lymphocyte antigen CD20) ELISA KitAlias: MS4A1ELISAKitReactivity: Human
文昌野野村氏菌Human MPST (3-mercaptopyruvate sulfurtransferase) ELISA KITAlias: MPSTELISAKitReactivity: Human
Human ADAM17(Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 17) ELISA KitAlias: TACE(TNFαConvertingEnzyme)|ADAM17|CD156b|CSVP|ADAM18|CD156bantigen|ADAMmetallopeptidasedomain18|disintegrinandmetalloproteinasedomain-containingprotein17|Snakevenom-likeprotease|TNF-alphaconvertase|TNF-alphaconvertingenzyme|TNF-alpha-convertingenzymeELISAKitReactivity: Human
粉狀畢氏酵母Human MREG (Melanoregulin) ELISA KITAlias: MREGELISAKitReactivity: Human
NCI-H647(人肺癌細(xì)胞)(通過STR鑒定)Human MADD (MAP kinase-activating death domain protein) ELISA KITAlias: MADDELISAKitReactivity: Human
乳桿菌屬Human MAS1 (Proto-oncogene Mas) ELISA KITAlias: MAS1ELISAKitReactivity: Human
短波單胞菌屬Human MAMLD1 (Mastermind-like domain-containing protein 1) ELISA KITAlias: MAMLD1ELISAKitReactivity: Human
硫色曲霉Human MMP15(Matrix metalloproteinase-15) ELISA KitAlias: MMP15ELISAKitReactivity: Human
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。