- 入駐時(shí)間： 2021-06-18
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細(xì)胞接收后的處理：
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
英文簡(jiǎn)稱
規(guī)格
貨號(hào)
RBL2H3
1×106
P-X9423
產(chǎn)品詳情：
細(xì)胞別稱；RBL2H3; RBL 2H3; RBL.2H3；大鼠嗜堿性白血病細(xì)胞
種屬來(lái)源；大鼠
組織來(lái)源；外周血；化學(xué)誘變嗜堿性細(xì)胞；白血病
生長(zhǎng)特性；貼壁生長(zhǎng)
細(xì)胞形態(tài)；成纖維細(xì)胞
細(xì)胞代數(shù)；10代以內(nèi)
背景簡(jiǎn)介；RBL-2H3是1978年國(guó)立牙科研究所的學(xué)實(shí)驗(yàn)室從Wistar大鼠保持腫瘤狀態(tài)的嗜堿性細(xì)胞中分離和克隆出來(lái)的嗜堿性白血病細(xì)胞株。這些細(xì)胞具有高親和力的IgE受體。通過(guò)集聚這些受體或與鈣離子載體協(xié)同作用可以激活它們分泌組胺及其他遞質(zhì)。這株細(xì)胞廣泛地用于研究肥大細(xì)胞FcERI和分泌的生化途徑。RBL-2H3細(xì)胞是研究FcERI結(jié)構(gòu)的模型。它們廣泛地用于研究細(xì)胞分泌的不同方面，包括細(xì)胞內(nèi)鈣濃度改變、磷酸脂酶激活、蛋白激酶和小G蛋白的作用。雖然幾乎所有批號(hào)的FBS都支持細(xì)胞的生長(zhǎng)，但在某些批號(hào)中FcERI集聚后脫粒化得更好。另一株大鼠嗜堿性細(xì)胞株(RBL，ATCC CRL-1378)不會(huì)脫?；?。
生物等級(jí)；1
細(xì)胞規(guī)格；1x106cells/T25或1mL凍存管
支原體檢測(cè)；無(wú)
保藏機(jī)構(gòu)；ATCC; CRL-2256 DSMZ; ACC-312
培養(yǎng)基；MEM+15%FBS+PS
培養(yǎng)條件；氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件；無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過(guò)夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理：
公司正在出售的產(chǎn)品：
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多巴胺受體調(diào)節(jié)因子DRRF抗體 |
魚類受精卵細(xì)胞凍存試劑盒（低溫） |
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KLF16 |
人生長(zhǎng)分化因子-15（GDF-15）elisa檢測(cè)試劑盒 |
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碳水化合物磺基轉(zhuǎn)移酶5抗體 |
組織磷酸二酯酶5（PDE5）活性酶連續(xù)循環(huán)定磷比色法定量檢測(cè)試劑盒 |
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CHST5 |
大鼠結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
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犬17羥孕酮(17-OHP)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè) |
小鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子CC(PDGF-CC)elisa檢測(cè)試劑盒 |
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/酵母胱硫醚-γ-合成酶（cystathionine γ-synthase；CGS）活性熒光定量檢測(cè)試劑盒 |
細(xì)胞色素C氧化酶7A2樣蛋白抗體 COX7A2L |
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小鼠抗增殖細(xì)胞核抗原抗體(PCNA)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
細(xì)胞粘合素(固生蛋白)抗體 Tenascin C |
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大鼠頂體蛋白(ACR)elisa檢測(cè)試劑盒 |
X-連鎖凋亡蛋白/性連鎖凋亡抑制蛋白單克隆抗體 XIAP |
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酪氨酸蛋白激酶3抗體 FER |
β-半乳糖苷 alpha2-3 唾液酸轉(zhuǎn)移酶抗體 ST3GAL4 |
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整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型-12抗體 ADAMTS12 |
APC標(biāo)記人CD8單克隆抗體 human CD8-APC |
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中心體肌動(dòng)蛋白γ1/增強(qiáng)型PI3K蛋白抗體 Centaurin gamma 1 |
A型禽流感病毒H1N1蛋白抗體 H1N1 Matrix Protein 1 |
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甘氨酸受體α3/GlyR α3抗體 Glycine Receptor alpha 3 |
跨膜γ羧基酸蛋白2抗體 PRRG2 |
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干擾素誘導(dǎo)35蛋白抗體 IFI35 |
LASP1蛋白抗體 LASP1 |
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KDELR3蛋白抗體 KDELR3 |
RBL-2H3大鼠嗜堿細(xì)胞白血病細(xì)胞驅(qū)動(dòng)蛋白家族成員3B抗體 KIF3B |
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溶質(zhì)載體家族22成員10抗體 SLC22A10 |
血清脊髓過(guò)氧化酶（MPO）活性高質(zhì)敏感（DTNB）比色法定量檢測(cè)試劑盒 |
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人α1微球蛋白/bikunin前體(AMBP)elisa檢測(cè)試劑盒 |
小鼠膠質(zhì)細(xì)胞系來(lái)源神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)elisa檢測(cè)試劑盒 |
實(shí)驗(yàn)步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開(kāi)始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。
