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第2年
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  • PCR反應(yīng)內(nèi)參基因的三大作用 PCR反應(yīng)內(nèi)參基因的三大作用：1.樣品提取質(zhì)量的判斷標(biāo)準(zhǔn)在PCR實驗中，內(nèi)參基因首先作為判斷樣品提取是否成功的標(biāo)準(zhǔn)。當(dāng)使用逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA進行PCR實驗時，如果結(jié)果為陰性，不能直接得出樣品中沒有目的基因的結(jié)論。只有當(dāng)內(nèi)參基因的CT值處于一個合理的范圍內(nèi)，例如20左右，我們才能確信樣品制備沒有問題，從而確保實驗結(jié)果的可靠性。2.目的基因表達量的計算基礎(chǔ)在進行相對定量PCR時，內(nèi)參基因是計算目的基
    發(fā)布時間：2024-10-29 11:04 點擊次數(shù)：5 次
  • 普通pcr引物設(shè)計和熒光定量pcr引物設(shè)計差異 普通pcr引物設(shè)計和熒光定量pcr引物設(shè)計的區(qū)別一、方法不同1、普通pcr引物設(shè)計：引物的優(yōu)劣直接關(guān)系到PCR的特異性與成功與否。2、熒光定量pcr引物設(shè)計：通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性探針，標(biāo)記跟蹤PCR產(chǎn)物進行實時監(jiān)測反應(yīng)，利用與之相適應(yīng)的軟件對產(chǎn)物進行分析，計算待測樣品模板的初始濃度二、原理不同1、普通pcr引物設(shè)計：為了找到一對合適的核苷酸片段，使其能有效地擴增模板DNA序列。2、熒光定
    發(fā)布時間：2024-10-25 13:53 點擊次數(shù)：7 次
  • ELISA實驗操控的儀器操作技能 為了使終究的ELISA試劑盒實驗效果就要較高的可靠性，應(yīng)在實驗開端前有必要好的前期準(zhǔn)備作業(yè)包括對實驗所需的儀器進行質(zhì)控。使儀器堅持作業(yè)狀況，應(yīng)建立維護和校對儀器的標(biāo)準(zhǔn)操作程序，常見需求操控的儀器包括：移液器（加樣槍）、溫箱、洗板機和酶標(biāo)儀。具體質(zhì)控操作技能整理的如下要求： 1、洗板機：每個設(shè)置洗板后的殘留液有各自的規(guī)矩，一般不逾越2μl；人工扣板時，墊紙不濕；守時檢查管孔是否阻塞。2、酶標(biāo)儀：常常
    發(fā)布時間：2024-10-21 10:58 點擊次數(shù)：13 次
  • ELISA實驗各項條件的選擇 在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:1、固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。2、包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相
    發(fā)布時間：2024-10-14 16:43 點擊次數(shù)：24 次
  • 抗體驗證的八種方法介紹 抗體驗證的八種方法：1.省略一抗這是測試由二級試劑引起的潛在背景的有用且重要的控制。然而，這個實驗沒有提供關(guān)于一抗質(zhì)量的信息。2.抗體信號與文獻數(shù)據(jù)一致WB中觀察到的分子量、組織分布和染色模式與文獻一致。這種驗證方法很容易執(zhí)行，但也有一些限制；例如，WB中條帶的正確分子量并不一定會告訴您該條帶是所需的目標(biāo)蛋白質(zhì)。在WB中很容易有數(shù)百種蛋白
    發(fā)布時間：2024-10-09 13:55 點擊次數(shù)：34 次
  • ELISA試劑盒檢測未知抗原的雙抗體夾心法過程 這種形式需要使用特定于該抗原不同表位的兩種不同抗體。這兩種抗體通常被稱為匹配抗體對。其中一種抗體包被于多孔板表面上并用作捕獲抗體以促進抗原的固定，另一種抗體被酶偶聯(lián)并促進抗原的檢測。ELISA試劑盒檢測未知抗原的雙抗體夾心法過程：1、包被：用包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/mL。向每個Elisa板孔中加入0.1mL，4℃過夜孵育。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3
    發(fā)布時間：2024-10-05 13:43 點擊次數(shù)：40 次
  • PCR反應(yīng)擴增產(chǎn)物出現(xiàn)多條帶分析 擴增產(chǎn)物出現(xiàn)多條帶（1）引物用量偏大，引物的特異性不高。應(yīng)調(diào)換引物或降低引物的使用量。（2）循環(huán)的次數(shù)過多。適當(dāng)增加模板的量，減少循環(huán)次數(shù)。（3）酶的用量偏高或酶的質(zhì)量不好，應(yīng)降低酶量或調(diào)換另一來源的酶。（4）退火溫度偏低，退火及延伸時間偏長。應(yīng)提高退火溫度，減少變性與延伸時間，也可采用二種溫度的PCR擴增。（5）樣品處理不當(dāng)。（6）Mg2+濃度偏高，因適當(dāng)調(diào)整Mg2+使用濃度。（7）若為PCR試
    發(fā)布時間：2024-09-27 14:19 點擊次數(shù)：62 次
  • 影響抗原抗體反應(yīng)的兩大因素 抗原與抗體發(fā)生特異性結(jié)合后，雖由親水膠體變?yōu)槭杷z體，若溶液中無電解質(zhì)參加，仍不出現(xiàn)可見反應(yīng)。為了促使沉淀物或凝集物的形成，常用0.85％氯化鈉或各種緩沖液作為抗原及抗體的稀釋液。由于氯化鈉在水溶液中解離成Na+和C1－，可分別中和膠體粒子上的電荷，使膠體粒子的電勢下降。當(dāng)電勢降至臨界電勢（12～15mV）以下時，則能促使抗原抗體復(fù)合物從溶液中析出，形成可見的沉淀物或凝集物。一、溫度在一定范圍內(nèi)，
    發(fā)布時間：2024-09-18 15:15 點擊次數(shù)：75 次
  • 試劑盒選購的注意事項 試劑盒選購的注意事項：1．要仔細閱讀試劑盒的說明書，對試劑盒選用方法有所了解，科學(xué)研究工作時應(yīng)選擇參考方法試劑盒，醫(yī)療預(yù)防工作應(yīng)選擇推薦的常規(guī)方法試劑盒，或選擇公認(rèn)的測定方法試劑盒。此外，對試劑盒的組成、方法性能指標(biāo)加以分析，是用于手工操作，還是用于自動分析儀。屬于后者，其實驗參數(shù)是否與本單位自動分析儀的實驗參數(shù)相符。2．有無衛(wèi)生部的批準(zhǔn)文號。凡已列入衛(wèi)生部臨床檢驗體外診斷試劑審批管理范圍的試劑盒
    發(fā)布時間：2024-09-10 10:45 點擊次數(shù)：73 次
  • PCR反應(yīng)主要成份Taq DNA聚合酶分析 一般TaqDNA聚合酶活性半衰期為92.5℃130min，95℃40min，97℃5min。現(xiàn)在人們又發(fā)現(xiàn)許多新的耐熱的DNA聚合酶，這些酶的活性在高溫下活性可維持更長時間。TaqDNA聚合酶的酶活性單位定義為74℃下，30min，摻入10nmol/LdNTP到核酸中所需的酶量。TaqDNA聚合酶的一個致命弱點是它的出錯率，一般PCR中出錯率為2×10-4核苷酸/每輪循環(huán)，在利用PCR克隆和進行序
    發(fā)布時間：2024-08-29 16:53 點擊次數(shù)：91 次
  • ?影響蛋白質(zhì)鹽析因素分析 蛋白質(zhì)通過鹽析的辦法沉淀的原理是降低蛋白質(zhì)的溶解度，使蛋白質(zhì)凝聚而從溶液中析出。影響鹽析的若干因素如下：1．蛋白質(zhì)濃度高濃度蛋白溶液可以節(jié)約鹽的用量，但許多蛋白質(zhì)的b和Ks常數(shù)十分接近，若蛋白濃度過高，會發(fā)生嚴(yán)重的共沉淀作用；在低濃度蛋白質(zhì)溶液中鹽析，所用的鹽量較多，而共沉淀作用比較少，因此需要在兩者之間進行適當(dāng)選擇。用于分步分離提純時，寧可選擇稀一些的蛋白質(zhì)溶液，多加一點中性鹽，使共沉淀作用減至
    發(fā)布時間：2024-08-20 10:06 點擊次數(shù)：149 次
  • RT-LAMP檢測試劑盒試驗使用方法 RT-LAMP檢測試劑盒試驗使用方法:一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。1.標(biāo)記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。2.用帶芯槍頭分別加入45μL熒光PCR模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。3.在7號管中加入5μL陽性對照（濃度為1×10E8拷貝/
    發(fā)布時間：2024-08-15 15:34 點擊次數(shù)：112 次
  • 防血清揮發(fā)的方法 防發(fā)揮的方法 1、使用前：必須滅活處理，56℃30分鐘。對于一些品質(zhì)高的胎牛血清和新牛血清可以考慮不經(jīng)滅活直接用于細胞培養(yǎng)。 2、儲存條件：一般儲存于－20℃，同時應(yīng)避免反復(fù)凍融。購買大包裝的血清后，首先要滅活處理，然后分裝成小包裝，儲存于－20℃，使用前融化。融化時現(xiàn)置于4℃。融化后的血清在4℃不宜長時間存放，應(yīng)盡快使用。 3、使用濃度：自從有了合成培養(yǎng)基，血清就是作為一種添加成分與合成培
    發(fā)布時間：2024-08-08 10:21 點擊次數(shù)：130 次
  • WB封閉液的選用要求 封閉是WesternBlot 至關(guān)重要的一部分，所以正確的封閉液選擇可以讓抗體更特異地和抗原結(jié)合，為成功的WB奠定基礎(chǔ)。封閉液的選用要求：1、常用封閉液為脫脂牛奶（光明或伊利等）、牛血清白蛋白（BSA）、無蛋白封閉液等。2、封閉液濃度：封閉時一般用5%脫脂牛奶，也可用1-5%BSA或1%無蛋白封閉液；配制二抗稀釋液一般為1-5%脫脂牛奶，全部用PBS稀釋。3、封閉時間：室溫1-2h、4度過夜或37
    發(fā)布時間：2024-07-31 13:58 點擊次數(shù)：682 次
  • 小鼠8異前列腺素ELISA試劑盒操作步驟 操作步驟:1. 標(biāo)準(zhǔn)品的加樣：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；。2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑100μl，空白孔除外。4.
    發(fā)布時間：2024-07-24 09:58 點擊次數(shù)：111 次
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