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第2年
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實(shí)時(shí)熒光定量PCR原理簡(jiǎn)述 實(shí)時(shí)熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種:熒光探針和熒光染料?,F(xiàn)將其原理簡(jiǎn)述如下:1.TaqMan熒光探針:PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時(shí),Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可發(fā)布時(shí)間:2023-07-20 13:03 點(diǎn)擊次數(shù):118 次
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熒光核酸試劑樣品處理方法 aqMan探針是一種寡核苷酸探針,它的熒光與目的序列的擴(kuò)增相關(guān)。它與目標(biāo)序列上游引物和下游引物之間的序列配對(duì)。熒光基團(tuán)連接在探針的5’末端,而淬滅劑則在3’末端。當(dāng)完整的探針與目標(biāo)序列配對(duì)時(shí),熒光基團(tuán)發(fā)射的熒光因與3’端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進(jìn)行延伸反應(yīng)時(shí),聚合酶的5’外切酶活性將探針進(jìn)行酶切,使得熒光基團(tuán)與淬滅劑分離。隨著擴(kuò)增循環(huán)數(shù)的增加,釋放出來的熒光基團(tuán)不斷積累。因此熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)發(fā)布時(shí)間:2023-07-13 14:53 點(diǎn)擊次數(shù):152 次
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人T細(xì)胞受體(TCR)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備事項(xiàng)小結(jié) 人T細(xì)胞受體(TCR)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備事項(xiàng)小結(jié):做好準(zhǔn)備工作正式開始時(shí)就可以降低問題的產(chǎn)生,避免出現(xiàn)手忙腳亂的情況,總結(jié)進(jìn)行ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)前需要做那些準(zhǔn)備工作如下:一、各種實(shí)驗(yàn)儀器及材料,如微量移液器,吸頭,醫(yī)用蒸餾水等。二、提醒您應(yīng)將盒內(nèi)各試劑取出,室溫放置至少30分鐘。三、應(yīng)用樣品稀釋液來稀釋樣品,按照1:100的體積比來稀釋樣品如10μl的樣品加入到1ml的應(yīng)用樣品稀釋液中,發(fā)布時(shí)間:2023-07-03 16:18 點(diǎn)擊次數(shù):153 次
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果膠酶測(cè)試盒測(cè)定步驟 果膠酶測(cè)試盒測(cè)定步驟:1.加樣1).除包被外都需45度加樣2).加樣體積要準(zhǔn)確3).管底加樣,不能加在管壁上4).加樣時(shí)不能產(chǎn)生氣泡2.溫浴1).加標(biāo)本后和加結(jié)合物后,應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫度的水浴箱。2).各ELISA板不應(yīng)疊在一起。3).為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕紗布的金屬濕盒中。4).加入底物后,反應(yīng)的時(shí)間和溫度通常不做嚴(yán)格要求。如室溫高于20℃,ELISA板可避光放在發(fā)布時(shí)間:2023-06-26 15:56 點(diǎn)擊次數(shù):167 次
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ELISA實(shí)驗(yàn)各項(xiàng)條件設(shè)置優(yōu)化 在ELISA中,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,其中包括:1、固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。2、包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在發(fā)布時(shí)間:2023-06-12 14:51 點(diǎn)擊次數(shù):315 次
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人結(jié)腸組織細(xì)胞操作要點(diǎn)小結(jié) 人結(jié)腸組織細(xì)胞操作要點(diǎn):1、將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。2、將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動(dòng)凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝發(fā)布時(shí)間:2023-05-30 10:23 點(diǎn)擊次數(shù):257 次
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qPCR 實(shí)驗(yàn)Ct 值偏大或普通 PCR 產(chǎn)量低分析 逆轉(zhuǎn)錄后的qPCR實(shí)驗(yàn)Ct值偏大或者普通PCR產(chǎn)量低。1、RNA 模板質(zhì)量差,需要重新制備RNA 模板,可通過瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)質(zhì)量。2、 逆轉(zhuǎn)錄后的 cDNA 中含有高濃度的模板RNA 和逆轉(zhuǎn)錄試劑成分,可能會(huì)對(duì)后續(xù)的PCR 產(chǎn)生抑制作用,所以可以適當(dāng)梯度提高cDNA 稀釋比例(通常來說可將cDNA原液稀釋5-10倍,其zui佳模板加入量以擴(kuò)增得到的Ct值在20-30個(gè)循環(huán)為好)。3、 起始的R發(fā)布時(shí)間:2023-05-25 11:36 點(diǎn)擊次數(shù):569 次
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細(xì)胞各形態(tài)分述 根據(jù)細(xì)胞是否貼附于支持物上生長(zhǎng),形態(tài)有所不同。呈懸浮生長(zhǎng)時(shí),不論細(xì)胞原來源于體內(nèi)何種類型細(xì)胞.由于生長(zhǎng)在液體環(huán)境中,胞體基本呈圓形。大多數(shù)細(xì)胞是貼附型生長(zhǎng)的。當(dāng)細(xì)胞貼附在支持物上后,細(xì)胞分化現(xiàn)象常變得不顯著,易失去它們?cè)隗w內(nèi)時(shí)的原有特征.在形態(tài)上表現(xiàn)單一化的現(xiàn)象。貼附于支持物表面后,開始仍為圓形,但為時(shí)很短,很快便經(jīng)過形態(tài)演變過渡成扁平形態(tài)。1.成纖維細(xì)胞型:此細(xì)胞形態(tài)與體內(nèi)成纖維細(xì)胞的相似而得名發(fā)布時(shí)間:2023-05-18 11:34 點(diǎn)擊次數(shù):701 次
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ELISA試劑盒檢測(cè)樣本血清應(yīng)用注意事項(xiàng) 大部分elisa檢測(cè)均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按慣例方法收集,應(yīng)留意防止溶血,紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP為符號(hào)的ELISA測(cè)定中,溶血標(biāo)本可能會(huì)添加非特異性顯色。血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)。如有xi 菌污染,?菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會(huì)發(fā)生假陽性反應(yīng)。 一般說來,在5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃。超越一周測(cè)定的需-20℃保存。凍住血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,散發(fā)布時(shí)間:2023-05-09 11:39 點(diǎn)擊次數(shù):228 次
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ELISA移液技術(shù)注意要點(diǎn) ELISA移液技術(shù)注意要點(diǎn)如下:1.移液時(shí),槍頭應(yīng)對(duì)準(zhǔn)孔,避免接觸孔壁及底部。2.移液后輕輕晃動(dòng)混勻試劑。3.如果您的樣品具有黏性,請(qǐng)預(yù)先潤(rùn)洗槍頭以消除表面張力的影響。吸液時(shí)等待片刻使體積平衡后再取出。4.移液不充分或移液體積不均,說明移液器需要校正。必要時(shí)請(qǐng)檢查移液器并重新校正。5.加樣時(shí),不同的試劑標(biāo)準(zhǔn)品和樣本間都要確保更換槍頭,避免交叉污染。6.確保使用合適的槍頭。不合適的槍頭無法正確量取吸發(fā)布時(shí)間:2023-05-06 13:31 點(diǎn)擊次數(shù):181 次
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PCR反應(yīng)引物純化的幾種方式選擇 PCR反應(yīng)引物純化的幾種方式選擇:1、脫鹽寡核苷酸合成后,為了純化寡核苷酸成為天然的DNA結(jié)構(gòu),首先必須去除保護(hù)基團(tuán)。通過濃氨水處理,合成的寡核苷酸從固相載體上分離,2-氰乙氧基--磷酸二脂鍵的保護(hù)基團(tuán),以及堿基的保護(hù)基團(tuán)基(苯甲?;彤惗』┍蝗コ?,從而形成了天然的DNA結(jié)構(gòu)。然而,必要的去保護(hù)步驟完成后,寡核苷酸混合物還包含幾種必須被去除的小分子有機(jī)化合物。所有非必須有機(jī)化合物被移除的過程通常發(fā)布時(shí)間:2023-04-25 11:12 點(diǎn)擊次數(shù):272 次
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DSMZ氧化節(jié)桿菌保存方法 DSMZ氧化節(jié)桿菌的保存方法:1、傳代保存法:培養(yǎng)基的濃度不宜過高,營(yíng)養(yǎng)成分不宜過于豐富,尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于適生長(zhǎng)溫度為好。發(fā)布時(shí)間:2023-04-21 15:00 點(diǎn)擊次數(shù):144 次
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比色法檢測(cè)試劑盒的定義及分類 比色法檢測(cè)試劑盒的定義及分類比色法檢測(cè)試劑盒,是一種常用的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工具,它能通過變色反應(yīng)來定量檢測(cè)樣品中所含成分的含量。比色法檢測(cè)試劑盒具有使用方便、充分可靠和高效精準(zhǔn)等特點(diǎn),因此在各個(gè)領(lǐng)域都得到了廣泛的應(yīng)用。根據(jù)檢測(cè)原理和檢測(cè)目標(biāo)的不同,比色法檢測(cè)試劑盒可以分為多種類型。其主要分類包括:環(huán)境水質(zhì)監(jiān)測(cè)、食品**檢測(cè)、生物醫(yī)學(xué)分析、工業(yè)化學(xué)與**等。其中環(huán)境水質(zhì)監(jiān)測(cè)主要是通過檢測(cè)水中有害物質(zhì)含量的發(fā)布時(shí)間:2023-04-13 15:10 點(diǎn)擊次數(shù):234 次
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豬苓多孔菌基本介紹 豬苓多孔菌基本介紹豬苓多孔菌(學(xué)名:Polyporusumbellatus(Pers.)Fr.)是多孔菌科、多孔菌屬多年生**。埋生于地下,呈現(xiàn)不規(guī)則塊狀,菌核表面有白色、灰色和黑色,菌核分為表皮和髓質(zhì),髓質(zhì)由菌絲黏連交織而成,菌核表皮細(xì)胞趨于木質(zhì)化,子實(shí)體由生殖菌絲、骨架菌絲和聯(lián)絡(luò)菌絲組成,菌蓋白色圓形,中部臍狀,有淡黃色的纖維層鱗片狀,呈放射狀,觸摸有軟毛絨感覺。子實(shí)體的大小與隱生在地下的菌核發(fā)布時(shí)間:2023-04-10 09:02 點(diǎn)擊次數(shù):195 次
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細(xì)胞株基本介紹 細(xì)胞株基本介紹通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的培養(yǎng)物稱為細(xì)胞株(CellStrain)。基本信息細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法,由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。原代培養(yǎng)物經(jīng)**傳代成功后即為細(xì)胞系(cellline),由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細(xì)胞世系所組成。如果不能繼續(xù)傳代,或傳代次數(shù)有限,細(xì)胞株可稱為有發(fā)布時(shí)間:2023-04-03 10:01 點(diǎn)擊次數(shù):114 次